CAJ | 학술논문

[目的]构建表达人内皮抑素的小环DNA载体与普通质粒,并观察其在真核细胞中的表达.[方法]从pcDNA3.1(+)中扩增Pcmv和BGHpolyA片段,定向克隆于pSO72质粒中,构建成pSP72-Pcmv-BGHpolyA.将从pSP72-hEndostatin-IRES-EGFP质粒中酶切得到的hEndostatin-IRES-EGFP分别克隆到pSP72-Pcmv-BGHpolyA和pcDNA3.1(+),构建成pSP72-Pcmv-hEndostatin-IRES-EGFP-BGHpolyA(pSP72-hES)和pcDNA3.1-hEndostatin-IRES-EGFP(pcDNA-hES).对质粒pSP72-hES和pψC31分别做双酶切,体外连接,构建成pψ-hES.pψ-hES转化TOP10细菌后,通过介导分子内重组,降解细菌骨架,获取只含目的基因表达盒的小环DNA载体mc-hES.将mc-hES、pψ-hES、pcDNA-hES分别转染CNE2细胞48 h后,通过RT-PCR和Western blot观察其表达.[结果]构建的pψ-hES、mc-hES、pcDNA-hES序列正确,转染CNE2细胞后,3种质粒均有人内皮抑素蛋白的表达.[结论]成功构建了真核表达载体mc-hES、pcDNA-hES、pψ-hES,经转染细胞后在mRNA和蛋白水平证实有hEndostatin的表达,且小环组明显高于其他两组.在相同情况下,小环载体的表达强度优于传统的质粒载体.
[목적]구건표체인내피억소적소배DNA재체여보통질립,병관찰기재진핵세포중적표체.[방법]종pcDNA3.1(+)중확증Pcmv화BGHpolyA편단,정향극륭우pSO72질립중,구건성pSP72-Pcmv-BGHpolyA.장종pSP72-hEndostatin-IRES-EGFP질립중매절득도적hEndostatin-IRES-EGFP분별극륭도pSP72-Pcmv-BGHpolyA화pcDNA3.1(+),구건성pSP72-Pcmv-hEndostatin-IRES-EGFP-BGHpolyA(pSP72-hES)화pcDNA3.1-hEndostatin-IRES-EGFP(pcDNA-hES).대질립pSP72-hES화pψC31분별주쌍매절,체외련접,구건성pψ-hES.pψ-hES전화TOP10세균후,통과개도분자내중조,강해세균골가,획취지함목적기인표체합적소배DNA재체mc-hES.장mc-hES、pψ-hES、pcDNA-hES분별전염CNE2세포48 h후,통과RT-PCR화Western blot관찰기표체.[결과]구건적pψ-hES、mc-hES、pcDNA-hES서렬정학,전염CNE2세포후,3충질립균유인내피억소단백적표체.[결론]성공구건료진핵표체재체mc-hES、pcDNA-hES、pψ-hES,경전염세포후재mRNA화단백수평증실유hEndostatin적표체,차소배조명현고우기타량조.재상동정황하,소배재체적표체강도우우전통적질립재체.