中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2007年
11期
847-851
,共5页
侯强红%余兴龙%李微%李润成%罗维%刘浩%尹恒%刘忠华
侯彊紅%餘興龍%李微%李潤成%囉維%劉浩%尹恆%劉忠華
후강홍%여흥룡%리미%리윤성%라유%류호%윤항%류충화
猪圆环病毒2型%大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)%融合表达%免疫原性
豬圓環病毒2型%大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)%融閤錶達%免疫原性
저원배병독2형%대장간균불내열장독소B아단위(LTB)%융합표체%면역원성
为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3'端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果.以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒为模板,用PCR的方法扩增PCV-2 Cap基因,并将其克隆到pET28a(+)中,构建得到pET-Cap质粒,利用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切切下Cap基因3'末端396 bp的片段,插入到pET-LTB原核表达质粒LTB基因的3'末端,从而构建pET-LTB△Cap原核表达质粒,将其转化大肠杆菌BL21 (DE3) pLysS后,用IPTG诱导重组菌,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物.表达产物经初步纯化后用昆明系小白鼠做免疫保护实验.结果表明:pET-LTB△Cap重组融合表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为29 Ku,表达量约占菌体蛋白的36.67%,融合蛋白能被PCV-2阳性血清识别.攻毒后,所有小鼠临床表现正常.用PCR检测有1/8的免疫小鼠感染了PCV-2,而对照组8只小鼠都感染了PCV-2.PCV-2 Cap基因3'端396 bp的片段与LTB基因融合能实现高效表达,表达产物免疫的小白鼠可抵抗PCV-2的攻击.此研究为PCV-2基因工程疫苗的研究奠定了基础.
為瞭穫得豬圓環病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣殼蛋白(Cap)基因3'耑396 bp的片段與大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)成熟肽編碼區融閤基因的高效錶達,併檢驗重組蛋白的免疫保護效果.以含PCV-2全基因組的pMDT PCV-2質粒為模闆,用PCR的方法擴增PCV-2 Cap基因,併將其剋隆到pET28a(+)中,構建得到pET-Cap質粒,利用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切切下Cap基因3'末耑396 bp的片段,插入到pET-LTB原覈錶達質粒LTB基因的3'末耑,從而構建pET-LTB△Cap原覈錶達質粒,將其轉化大腸桿菌BL21 (DE3) pLysS後,用IPTG誘導重組菌,用SDS-PAGE電泳和Western blot檢測誘導物.錶達產物經初步純化後用昆明繫小白鼠做免疫保護實驗.結果錶明:pET-LTB△Cap重組融閤錶達質粒在大腸桿菌中實現瞭高效錶達,融閤蛋白分子量約為29 Ku,錶達量約佔菌體蛋白的36.67%,融閤蛋白能被PCV-2暘性血清識彆.攻毒後,所有小鼠臨床錶現正常.用PCR檢測有1/8的免疫小鼠感染瞭PCV-2,而對照組8隻小鼠都感染瞭PCV-2.PCV-2 Cap基因3'耑396 bp的片段與LTB基因融閤能實現高效錶達,錶達產物免疫的小白鼠可牴抗PCV-2的攻擊.此研究為PCV-2基因工程疫苗的研究奠定瞭基礎.
위료획득저원배병독2형(Porcine circovirus type 2,PCV-2)의각단백(Cap)기인3'단396 bp적편단여대장간균불내열장독소B아단위(LTB)성숙태편마구융합기인적고효표체,병검험중조단백적면역보호효과.이함PCV-2전기인조적pMDT PCV-2질립위모판,용PCR적방법확증PCV-2 Cap기인,병장기극륭도pET28a(+)중,구건득도pET-Cap질립,이용EcoR Ⅰ화Hind Ⅲ쌍매절절하Cap기인3'말단396 bp적편단,삽입도pET-LTB원핵표체질립LTB기인적3'말단,종이구건pET-LTB△Cap원핵표체질립,장기전화대장간균BL21 (DE3) pLysS후,용IPTG유도중조균,용SDS-PAGE전영화Western blot검측유도물.표체산물경초보순화후용곤명계소백서주면역보호실험.결과표명:pET-LTB△Cap중조융합표체질립재대장간균중실현료고효표체,융합단백분자량약위29 Ku,표체량약점균체단백적36.67%,융합단백능피PCV-2양성혈청식별.공독후,소유소서림상표현정상.용PCR검측유1/8적면역소서감염료PCV-2,이대조조8지소서도감염료PCV-2.PCV-2 Cap기인3'단396 bp적편단여LTB기인융합능실현고효표체,표체산물면역적소백서가저항PCV-2적공격.차연구위PCV-2기인공정역묘적연구전정료기출.
