CAJ | 학술논문

目的:筛选有效抑制T24细胞survivin表达的siRNA序列,并构建其质粒载体,为后续研究提供基础.方法:设计并合成针对survivin的siRNA,转染T24细胞.用RT-PCR方法测定干扰后细胞survivin mRNA表达,Western-blot方法测定干扰后survivin蛋白表达,比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA,并构建相应的质粒载体(shRNA).结果:①siRNA转染T24细胞有较高的转染效率;②半定量RT-PCR:1号siRNA干扰T24细胞48 h后survivin基因mRNA表达最低,有显著差异(P＜0.05),抑制率70%左右.③Western-blot:1号siRNA干扰T24细胞72 h后survivin蛋白表达最低,有显著差异(P＜0.05),抑制率60%左右.④Western-blot方法测定T24细胞转染1号siRNA后连续7 d survivin蛋白表达量变化:干扰后48～96 h survivin蛋白表达量最低,有显著差异(P＜0.05).⑤以1号siRNA序列构建质粒栽体并转染T24细胞成功,转染效率较高,质粒本身对细胞无毒无害.结论:①所设计、合成的siRNA中,1号survivin-siRNA对T24细胞survivin表达有明显抑制作用;②根据实验结果构建的质粒裁体及其对照质粒可用于T24细胞转染,供进一步实验研究.
목적:사선유효억제T24세포survivin표체적siRNA서렬,병구건기질립재체,위후속연구제공기출.방법:설계병합성침대survivin적siRNA,전염T24세포.용RT-PCR방법측정간우후세포survivin mRNA표체,Western-blot방법측정간우후survivin단백표체,비교기억제솔,사선출유효억제파기인표체적siRNA,병구건상응적질립재체(shRNA).결과:①siRNA전염T24세포유교고적전염효솔;②반정량RT-PCR:1호siRNA간우T24세포48 h후survivin기인mRNA표체최저,유현저차이(P＜0.05),억제솔70%좌우.③Western-blot:1호siRNA간우T24세포72 h후survivin단백표체최저,유현저차이(P＜0.05),억제솔60%좌우.④Western-blot방법측정T24세포전염1호siRNA후련속7 d survivin단백표체량변화:간우후48～96 h survivin단백표체량최저,유현저차이(P＜0.05).⑤이1호siRNA서렬구건질립재체병전염T24세포성공,전염효솔교고,질립본신대세포무독무해.결론:①소설계、합성적siRNA중,1호survivin-siRNA대T24세포survivin표체유명현억제작용;②근거실험결과구건적질립재체급기대조질립가용우T24세포전염,공진일보실험연구.