中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
10期
75-80
,共6页
徐根明%丁先锋%朱聪%郭江峰
徐根明%丁先鋒%硃聰%郭江峰
서근명%정선봉%주총%곽강봉
寡核苷酸%PC%探针%检测
寡覈苷痠%PC%探針%檢測
과핵감산%PC%탐침%검측
利用芯片点样仪将5种侵染马铃薯的病毒/类病毒(苜蓿花叶病毒、黄瓜花叶病毒、黄瓜花叶病毒-卫星病毒、马铃薯病毒Y、马铃薯块茎纺锤状类病毒)的保守区寡核苷酸(Oligonucleotide,oligo)探针和PCR探针点样于玻片,并以植物18S rRNA作为内参照制成基因芯片.研究探针浓度、杂交时间、杂交温度以及点样液对芯片杂交的影响,并验证优化后病毒检测芯片的特异性.结果表明,寡核苷酸探针浓度介于5～20 μmol/L之间对杂交信号强度影响不大,PCR探针浓度与杂交信号强度间呈线性关系;在45℃杂交4 h时,芯片的杂交信号最强,且该条件下进行杂交对两种探针芯片的影响趋势一致;点样液中以DMSO的杂交效果最好.经过整体条件优化后的两种探针芯片在杂交检测上具有较高的特异性,适于检测植物病毒.
利用芯片點樣儀將5種侵染馬鈴藷的病毒/類病毒(苜蓿花葉病毒、黃瓜花葉病毒、黃瓜花葉病毒-衛星病毒、馬鈴藷病毒Y、馬鈴藷塊莖紡錘狀類病毒)的保守區寡覈苷痠(Oligonucleotide,oligo)探針和PCR探針點樣于玻片,併以植物18S rRNA作為內參照製成基因芯片.研究探針濃度、雜交時間、雜交溫度以及點樣液對芯片雜交的影響,併驗證優化後病毒檢測芯片的特異性.結果錶明,寡覈苷痠探針濃度介于5～20 μmol/L之間對雜交信號彊度影響不大,PCR探針濃度與雜交信號彊度間呈線性關繫;在45℃雜交4 h時,芯片的雜交信號最彊,且該條件下進行雜交對兩種探針芯片的影響趨勢一緻;點樣液中以DMSO的雜交效果最好.經過整體條件優化後的兩種探針芯片在雜交檢測上具有較高的特異性,適于檢測植物病毒.
이용심편점양의장5충침염마령서적병독/류병독(목숙화협병독、황과화협병독、황과화협병독-위성병독、마령서병독Y、마령서괴경방추상류병독)적보수구과핵감산(Oligonucleotide,oligo)탐침화PCR탐침점양우파편,병이식물18S rRNA작위내삼조제성기인심편.연구탐침농도、잡교시간、잡교온도이급점양액대심편잡교적영향,병험증우화후병독검측심편적특이성.결과표명,과핵감산탐침농도개우5～20 μmol/L지간대잡교신호강도영향불대,PCR탐침농도여잡교신호강도간정선성관계;재45℃잡교4 h시,심편적잡교신호최강,차해조건하진행잡교대량충탐침심편적영향추세일치;점양액중이DMSO적잡교효과최호.경과정체조건우화후적량충탐침심편재잡교검측상구유교고적특이성,괄우검측식물병독.
