天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2006年
7期
436-438
,共3页
徐昭%陈锦英%李力%杨东靖
徐昭%陳錦英%李力%楊東靖
서소%진금영%리력%양동정
汉坦病毒%大肠杆菌%克隆%基因表达
漢坦病毒%大腸桿菌%剋隆%基因錶達
한탄병독%대장간균%극륭%기인표체
目的:在大肠埃希菌中克隆和表达汉坦病毒SEO型及HTN型S基因.方法:PCR扩增汉坦病毒SEO型L99株及HTN型Z10株S基因读码区,前者经EcoRⅠ及XhoⅠ双酶切,后者经SacⅠ及XhoⅠ双酶切,将两者定向克隆入pET32a(+),转入感受态E.coli Top10.获取重组质粒,经PCR、双酶切及序列分析鉴定后,转入E.coli BL21感受态,经IPTG诱导表达,其产物经SDS-PAGE和Western-blot检测.结果:SEO型L99株及HTN型Z10株S基因正确克隆于pET32a(+),目的蛋白的分子质量约为67.1 ku,表达量占菌体总蛋白的40%以上,Western-blot有特异性条带.结论:SEO型及HTN型汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中获得表达,为其后的应用奠定了基础.
目的:在大腸埃希菌中剋隆和錶達漢坦病毒SEO型及HTN型S基因.方法:PCR擴增漢坦病毒SEO型L99株及HTN型Z10株S基因讀碼區,前者經EcoRⅠ及XhoⅠ雙酶切,後者經SacⅠ及XhoⅠ雙酶切,將兩者定嚮剋隆入pET32a(+),轉入感受態E.coli Top10.穫取重組質粒,經PCR、雙酶切及序列分析鑒定後,轉入E.coli BL21感受態,經IPTG誘導錶達,其產物經SDS-PAGE和Western-blot檢測.結果:SEO型L99株及HTN型Z10株S基因正確剋隆于pET32a(+),目的蛋白的分子質量約為67.1 ku,錶達量佔菌體總蛋白的40%以上,Western-blot有特異性條帶.結論:SEO型及HTN型漢坦病毒S基因在大腸埃希菌中穫得錶達,為其後的應用奠定瞭基礎.
목적:재대장애희균중극륭화표체한탄병독SEO형급HTN형S기인.방법:PCR확증한탄병독SEO형L99주급HTN형Z10주S기인독마구,전자경EcoRⅠ급XhoⅠ쌍매절,후자경SacⅠ급XhoⅠ쌍매절,장량자정향극륭입pET32a(+),전입감수태E.coli Top10.획취중조질립,경PCR、쌍매절급서렬분석감정후,전입E.coli BL21감수태,경IPTG유도표체,기산물경SDS-PAGE화Western-blot검측.결과:SEO형L99주급HTN형Z10주S기인정학극륭우pET32a(+),목적단백적분자질량약위67.1 ku,표체량점균체총단백적40%이상,Western-blot유특이성조대.결론:SEO형급HTN형한탄병독S기인재대장애희균중획득표체,위기후적응용전정료기출.
