CAJ | 학술논문

利用RT-PCR技术从小鼠脂肪组织中扩增了OB基因,并利用定向克隆技术克隆至原核表达载体pTO-T7.将构建好的质粒导入表达型大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行Western-blot检测.表达产物利用亲和层析技术进行纯化.结果显示:表达的带有his标签的小鼠leptin融合蛋白,分子量约为20 ku.0.5 mmol/L的IPTG在37℃诱导2.5 h时,leptin融合蛋白的表达量达到最大,达菌体总蛋白50%以上.表达产物经过纯化,纯度可达90%以上.Western-blot杂交显示,小鼠leptin融合蛋白有很强的抗原特异性.
이용RT-PCR기술종소서지방조직중확증료OB기인,병이용정향극륭기술극륭지원핵표체재체pTO-T7.장구건호적질립도입표체형대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체,병대표체산물진행Western-blot검측.표체산물이용친화층석기술진행순화.결과현시:표체적대유his표첨적소서leptin융합단백,분자량약위20 ku.0.5 mmol/L적IPTG재37℃유도2.5 h시,leptin융합단백적표체량체도최대,체균체총단백50%이상.표체산물경과순화,순도가체90%이상.Western-blot잡교현시,소서leptin융합단백유흔강적항원특이성.