细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
2期
193-195,199
,共4页
王阶平%庄国洪%杨桂旺%王臻%李文珠%谢莲英%颜江华
王階平%莊國洪%楊桂旺%王臻%李文珠%謝蓮英%顏江華
왕계평%장국홍%양계왕%왕진%리문주%사련영%안강화
人源化%抗人肺癌单域抗体%表达%活性分析
人源化%抗人肺癌單域抗體%錶達%活性分析
인원화%항인폐암단역항체%표체%활성분석
目的: 构建人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH基因, 在大肠杆菌中表达, 对其蛋白活性进行分析.方法: 采用CDR移植技术对mAb3D3的重链可变区进行人源化, 通过重叠PCR获得hu3D3VH的基因.构建pET22(b+)/hu3D3VH表达载体, 并转化大肠杆菌BL21(DE3), 在IPTG诱导下表达.表达产物通过Ni亲和层析柱纯化.采用间接ELISA和竞争抑制ELISA法进行活性分析.结果: 通过重叠PCR获得序列正确的目的基因.目的蛋白以包涵体的形式表达, 表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后, 目的蛋白的纯度达95%以上.hu3D3VH具有与亲本抗体相同的抗原反应性, 并能抑制mAb3D3与L342细胞的结合.结论: 获得的人源化单域抗体hu3D3VH, 保留了与mAb3D3相同的反应性和特异性, 为进一步临床应用奠定了基础.
目的: 構建人源化的抗人肺癌單域抗體hu3D3VH基因, 在大腸桿菌中錶達, 對其蛋白活性進行分析.方法: 採用CDR移植技術對mAb3D3的重鏈可變區進行人源化, 通過重疊PCR穫得hu3D3VH的基因.構建pET22(b+)/hu3D3VH錶達載體, 併轉化大腸桿菌BL21(DE3), 在IPTG誘導下錶達.錶達產物通過Ni親和層析柱純化.採用間接ELISA和競爭抑製ELISA法進行活性分析.結果: 通過重疊PCR穫得序列正確的目的基因.目的蛋白以包涵體的形式錶達, 錶達量佔菌體總蛋白的30%以上.純化後, 目的蛋白的純度達95%以上.hu3D3VH具有與親本抗體相同的抗原反應性, 併能抑製mAb3D3與L342細胞的結閤.結論: 穫得的人源化單域抗體hu3D3VH, 保留瞭與mAb3D3相同的反應性和特異性, 為進一步臨床應用奠定瞭基礎.
목적: 구건인원화적항인폐암단역항체hu3D3VH기인, 재대장간균중표체, 대기단백활성진행분석.방법: 채용CDR이식기술대mAb3D3적중련가변구진행인원화, 통과중첩PCR획득hu3D3VH적기인.구건pET22(b+)/hu3D3VH표체재체, 병전화대장간균BL21(DE3), 재IPTG유도하표체.표체산물통과Ni친화층석주순화.채용간접ELISA화경쟁억제ELISA법진행활성분석.결과: 통과중첩PCR획득서렬정학적목적기인.목적단백이포함체적형식표체, 표체량점균체총단백적30%이상.순화후, 목적단백적순도체95%이상.hu3D3VH구유여친본항체상동적항원반응성, 병능억제mAb3D3여L342세포적결합.결론: 획득적인원화단역항체hu3D3VH, 보류료여mAb3D3상동적반응성화특이성, 위진일보림상응용전정료기출.
