中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2000年
4期
343-346
,共4页
蒋玉文%杨京岚%许崇波%朱平%龚人雄%薛应照
蔣玉文%楊京嵐%許崇波%硃平%龔人雄%薛應照
장옥문%양경람%허숭파%주평%공인웅%설응조
霍乱毒素B亚单位%基因克隆%PCR%核苷酸序列
霍亂毒素B亞單位%基因剋隆%PCR%覈苷痠序列
곽란독소B아단위%기인극륭%PCR%핵감산서렬
利用PCR技术从含有霍乱毒素B亚单位(CTB)基因的质粒pUCT1中扩增出不包括信号肽的309bp的CTB全基因,并通过点突变技术消除了CTB阅读框内的终止密码子(TAA→GAA),以便于在CTB基因的下游融合其他的外源基因.用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ对PCR产物进行双酶切,以T4DNA连接酶将其定向连接于经同样酶切处理的质粒pET-28b(+)的多克隆位点上,构建成重组质粒pECTB,转化至BL21(DE3)中.经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切分析和PCR扩增检测,证明重组质粒pECTB中含有CTB基因.核苷酸序列分析表明,克隆的CTB基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的.
利用PCR技術從含有霍亂毒素B亞單位(CTB)基因的質粒pUCT1中擴增齣不包括信號肽的309bp的CTB全基因,併通過點突變技術消除瞭CTB閱讀框內的終止密碼子(TAA→GAA),以便于在CTB基因的下遊融閤其他的外源基因.用限製性內切酶BamHⅠ和EcoRⅠ對PCR產物進行雙酶切,以T4DNA連接酶將其定嚮連接于經同樣酶切處理的質粒pET-28b(+)的多剋隆位點上,構建成重組質粒pECTB,轉化至BL21(DE3)中.經BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切分析和PCR擴增檢測,證明重組質粒pECTB中含有CTB基因.覈苷痠序列分析錶明,剋隆的CTB基因在重組質粒中的連接嚮位和閱讀框架是正確的.
이용PCR기술종함유곽란독소B아단위(CTB)기인적질립pUCT1중확증출불포괄신호태적309bp적CTB전기인,병통과점돌변기술소제료CTB열독광내적종지밀마자(TAA→GAA),이편우재CTB기인적하유융합기타적외원기인.용한제성내절매BamHⅠ화EcoRⅠ대PCR산물진행쌍매절,이T4DNA련접매장기정향련접우경동양매절처리적질립pET-28b(+)적다극륭위점상,구건성중조질립pECTB,전화지BL21(DE3)중.경BamHⅠ화EcoRⅠ쌍매절분석화PCR확증검측,증명중조질립pECTB중함유CTB기인.핵감산서렬분석표명,극륭적CTB기인재중조질립중적련접향위화열독광가시정학적.
