生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
1期
63-68
,共6页
杨丽琛%常团结%陈宛新%杨晓光%朱祯
楊麗琛%常糰結%陳宛新%楊曉光%硃禎
양려침%상단결%진완신%양효광%주정
豇豆胰蛋白酶抑制剂%遗传修饰食品%安全性评价%融合表达%活性测定
豇豆胰蛋白酶抑製劑%遺傳脩飾食品%安全性評價%融閤錶達%活性測定
강두이단백매억제제%유전수식식품%안전성평개%융합표체%활성측정
豇豆胰蛋白酶抑制剂 (Cowpea Trypsin Inhibitor) 基因 (CpTI) 因其抗虫谱广及不易耐受等优点在植物基因工程中得到广泛应用.为进行遗传修饰食品(Genetically modified foods, GMF)中所含CpTI基因表达产物的安全性评价,我们需要在体外微生物体系中获得大量的CpTI蛋白.采用pGEX融合蛋白表达系统,将CpTI与GST的编码序列在大肠杆菌BL21中进行融合表达,表达产物达到菌体总蛋白的40%.经一步Glutathione Sephrose 4B亲和纯化,融合蛋白GST-CpTI纯度达到90%以上.将Thrombin蛋白酶与融合蛋白过夜作用,可获得切掉了GST标签的CpTI蛋白.活性测定显示GST-CpTI及CpTI蛋白均具有明显的胰蛋白酶抑制剂活性.用纯化的融合蛋白免疫家兔还可诱导产生高效价的抗体,经ELISA检测抗体滴度>1∶20000.Western Blotting 实验显示,无论是菌体超声裂解后总蛋白中的CpTI蛋白或是经纯化后的CpTI蛋白均可与自制的抗体发生特异性结合.这为进一步进行CpTI蛋白的安全性评价工作奠定了良好基础.
豇豆胰蛋白酶抑製劑 (Cowpea Trypsin Inhibitor) 基因 (CpTI) 因其抗蟲譜廣及不易耐受等優點在植物基因工程中得到廣汎應用.為進行遺傳脩飾食品(Genetically modified foods, GMF)中所含CpTI基因錶達產物的安全性評價,我們需要在體外微生物體繫中穫得大量的CpTI蛋白.採用pGEX融閤蛋白錶達繫統,將CpTI與GST的編碼序列在大腸桿菌BL21中進行融閤錶達,錶達產物達到菌體總蛋白的40%.經一步Glutathione Sephrose 4B親和純化,融閤蛋白GST-CpTI純度達到90%以上.將Thrombin蛋白酶與融閤蛋白過夜作用,可穫得切掉瞭GST標籤的CpTI蛋白.活性測定顯示GST-CpTI及CpTI蛋白均具有明顯的胰蛋白酶抑製劑活性.用純化的融閤蛋白免疫傢兔還可誘導產生高效價的抗體,經ELISA檢測抗體滴度>1∶20000.Western Blotting 實驗顯示,無論是菌體超聲裂解後總蛋白中的CpTI蛋白或是經純化後的CpTI蛋白均可與自製的抗體髮生特異性結閤.這為進一步進行CpTI蛋白的安全性評價工作奠定瞭良好基礎.
강두이단백매억제제 (Cowpea Trypsin Inhibitor) 기인 (CpTI) 인기항충보엄급불역내수등우점재식물기인공정중득도엄범응용.위진행유전수식식품(Genetically modified foods, GMF)중소함CpTI기인표체산물적안전성평개,아문수요재체외미생물체계중획득대량적CpTI단백.채용pGEX융합단백표체계통,장CpTI여GST적편마서렬재대장간균BL21중진행융합표체,표체산물체도균체총단백적40%.경일보Glutathione Sephrose 4B친화순화,융합단백GST-CpTI순도체도90%이상.장Thrombin단백매여융합단백과야작용,가획득절도료GST표첨적CpTI단백.활성측정현시GST-CpTI급CpTI단백균구유명현적이단백매억제제활성.용순화적융합단백면역가토환가유도산생고효개적항체,경ELISA검측항체적도>1∶20000.Western Blotting 실험현시,무론시균체초성렬해후총단백중적CpTI단백혹시경순화후적CpTI단백균가여자제적항체발생특이성결합.저위진일보진행CpTI단백적안전성평개공작전정료량호기출.
