CAJ | 학술논문

观察糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂重组GST-KGDX(谷胱甘肽S-转移酶-赖-甘-天冬-X)融合蛋白对血小板聚集的抑制作用.设计合成了两条编码KGDX(赖-甘-天冬-X)的寡核苷酸链,两端分别为BamHI和XhoⅠ酶切位点.将该基因插入原核高效表达载体pGEX-4T-1的tac启动子下游,获得重组质粒pGEX-4T-1KGDX,转化大肠杆菌DH5a,37℃诱导使重组子表达.GST-KGDX融合蛋白具有可溶性,产量为35 mg/L培养基,表达量占菌体总蛋白的48.02%.破碎菌体上清经谷胱甘肽-琼脂糖悬珠亲和层析法获得纯度为95%的重组蛋白.血小板凝聚仪检测活性表明,在体外GST-KGDX融合蛋白抑制ADP诱导的人血小板聚集作用强于GST(P＜0.05或＜0.01).全血流式细胞术结果表明,GST-KGDX能与GPⅡb/Ⅲa受体特异性结合.结论:大肠杆菌中能够表达出较高产量的GST-KGDX融合蛋白,为抗血小板药物提供了一个很好的蛋白质来源.
관찰당단백Ⅱb/Ⅲa수체길항제중조GST-KGDX(곡광감태S-전이매-뢰-감-천동-X)융합단백대혈소판취집적억제작용.설계합성료량조편마KGDX(뢰-감-천동-X)적과핵감산련,량단분별위BamHI화XhoⅠ매절위점.장해기인삽입원핵고효표체재체pGEX-4T-1적tac계동자하유,획득중조질립pGEX-4T-1KGDX,전화대장간균DH5a,37℃유도사중조자표체.GST-KGDX융합단백구유가용성,산량위35 mg/L배양기,표체량점균체총단백적48.02%.파쇄균체상청경곡광감태-경지당현주친화층석법획득순도위95%적중조단백.혈소판응취의검측활성표명,재체외GST-KGDX융합단백억제ADP유도적인혈소판취집작용강우GST(P＜0.05혹＜0.01).전혈류식세포술결과표명,GST-KGDX능여GPⅡb/Ⅲa수체특이성결합.결론:대장간균중능구표체출교고산량적GST-KGDX융합단백,위항혈소판약물제공료일개흔호적단백질래원.