蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2002年
1期
39-44
,共6页
杨瑞丽%金勇丰%吴玉澄%张耀洲
楊瑞麗%金勇豐%吳玉澄%張耀洲
양서려%금용봉%오옥징%장요주
家蚕核型多角体病毒%多角体蛋白基因%乙肝表面抗原中蛋白%前S2抗原%表达
傢蠶覈型多角體病毒%多角體蛋白基因%乙肝錶麵抗原中蛋白%前S2抗原%錶達
가잠핵형다각체병독%다각체단백기인%을간표면항원중단백%전S2항원%표체
应用PCR突变的方法,在乙肝病毒表面抗原(HBsAg)前S2序列的5端融合了BmNPV多角体蛋白基因5端的12个碱基,获得了融合乙肝表面抗原中蛋白基因(HBMp);通过同源重组将其插入到BmNPV基因组多角体启动子后,构建了重组杆状病毒BmPAK-HBMp.用重组病毒BmPAK-HBMp和BmPAK-HBM(带有非融合乙肝表面抗原中蛋白基因)感染家蚕细胞及蛹,对两种病毒的表达产物用ELISA进行了跟踪检测,结果表明融合蛋白比非融合蛋白HBsAg活性提高了60%～80%,作为HBsAg构成部分的PreS2抗原性提高了8～10倍;并且HBsAg和PreS2-Ag表达的时相曲线不同,PreS2-Ag的表达量比HBsAg早1～2d达到最大值.ELISA检测和Western blotting分析表明,多角体基因序列的存在更有利于中蛋白全基因(PreS2+S)的表达.
應用PCR突變的方法,在乙肝病毒錶麵抗原(HBsAg)前S2序列的5耑融閤瞭BmNPV多角體蛋白基因5耑的12箇堿基,穫得瞭融閤乙肝錶麵抗原中蛋白基因(HBMp);通過同源重組將其插入到BmNPV基因組多角體啟動子後,構建瞭重組桿狀病毒BmPAK-HBMp.用重組病毒BmPAK-HBMp和BmPAK-HBM(帶有非融閤乙肝錶麵抗原中蛋白基因)感染傢蠶細胞及蛹,對兩種病毒的錶達產物用ELISA進行瞭跟蹤檢測,結果錶明融閤蛋白比非融閤蛋白HBsAg活性提高瞭60%～80%,作為HBsAg構成部分的PreS2抗原性提高瞭8～10倍;併且HBsAg和PreS2-Ag錶達的時相麯線不同,PreS2-Ag的錶達量比HBsAg早1～2d達到最大值.ELISA檢測和Western blotting分析錶明,多角體基因序列的存在更有利于中蛋白全基因(PreS2+S)的錶達.
응용PCR돌변적방법,재을간병독표면항원(HBsAg)전S2서렬적5단융합료BmNPV다각체단백기인5단적12개감기,획득료융합을간표면항원중단백기인(HBMp);통과동원중조장기삽입도BmNPV기인조다각체계동자후,구건료중조간상병독BmPAK-HBMp.용중조병독BmPAK-HBMp화BmPAK-HBM(대유비융합을간표면항원중단백기인)감염가잠세포급용,대량충병독적표체산물용ELISA진행료근종검측,결과표명융합단백비비융합단백HBsAg활성제고료60%～80%,작위HBsAg구성부분적PreS2항원성제고료8～10배;병차HBsAg화PreS2-Ag표체적시상곡선불동,PreS2-Ag적표체량비HBsAg조1～2d체도최대치.ELISA검측화Western blotting분석표명,다각체기인서렬적존재경유리우중단백전기인(PreS2+S)적표체.
