复旦学报(自然科学版)
複旦學報(自然科學版)
복단학보(자연과학판)
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2003年
4期
564-569,575
,共7页
丁天%洪洁%徐颖%周璇%江培翃%钱志康%张学光%黄伟达
丁天%洪潔%徐穎%週璇%江培翃%錢誌康%張學光%黃偉達
정천%홍길%서영%주선%강배굉%전지강%장학광%황위체
可溶性CD40L%异亮氨酸拉链结构%表达%生物学活性
可溶性CD40L%異亮氨痠拉鏈結構%錶達%生物學活性
가용성CD40L%이량안산랍련결구%표체%생물학활성
CD40配基(CD40L)为TNF超家族中的一员,瞬时表达于激活的CD4+的T淋巴细胞上. 自然状态下膜上三聚体的CD40L通过和CD40受体(CD40 R)结合,在免疫监视和肿瘤免疫中发挥作用. 以PCR方法从pcDNA3-CD40L质粒上扩增得到编码CD40L基因的胞外部分sCD40L,并将该片段插入大肠杆菌表达质粒pET30a上,构建得到大肠杆菌表达质粒pET30a-sCD40L;同时,在sCD40L的N端融合了异亮氨酸拉链(Isoleucine Zipper,IZ)结构,构建得到表达质粒pET30a-IZ-sCD40L. 表达质粒在大肠杆菌中表达,得到可溶性的重组人CD40L和IZ-CD40L. SDS-PAGE分析结果表明重组人rhsCD40L和IZ-rhsCD40L在相应分子质量位置都有明显的条带产生,并得到Western blotting的确认. 非SDS-PAGE电泳结果显示,异亮氨酸拉链结构有利于rhsCD40L蛋白形成聚合体结构. B细胞增殖实验和人骨髓瘤细胞株XG2凋亡实验结果都表明,异亮氨酸拉链结构提高了rhsCD40L的生物学活性.
CD40配基(CD40L)為TNF超傢族中的一員,瞬時錶達于激活的CD4+的T淋巴細胞上. 自然狀態下膜上三聚體的CD40L通過和CD40受體(CD40 R)結閤,在免疫鑑視和腫瘤免疫中髮揮作用. 以PCR方法從pcDNA3-CD40L質粒上擴增得到編碼CD40L基因的胞外部分sCD40L,併將該片段插入大腸桿菌錶達質粒pET30a上,構建得到大腸桿菌錶達質粒pET30a-sCD40L;同時,在sCD40L的N耑融閤瞭異亮氨痠拉鏈(Isoleucine Zipper,IZ)結構,構建得到錶達質粒pET30a-IZ-sCD40L. 錶達質粒在大腸桿菌中錶達,得到可溶性的重組人CD40L和IZ-CD40L. SDS-PAGE分析結果錶明重組人rhsCD40L和IZ-rhsCD40L在相應分子質量位置都有明顯的條帶產生,併得到Western blotting的確認. 非SDS-PAGE電泳結果顯示,異亮氨痠拉鏈結構有利于rhsCD40L蛋白形成聚閤體結構. B細胞增殖實驗和人骨髓瘤細胞株XG2凋亡實驗結果都錶明,異亮氨痠拉鏈結構提高瞭rhsCD40L的生物學活性.
CD40배기(CD40L)위TNF초가족중적일원,순시표체우격활적CD4+적T림파세포상. 자연상태하막상삼취체적CD40L통과화CD40수체(CD40 R)결합,재면역감시화종류면역중발휘작용. 이PCR방법종pcDNA3-CD40L질립상확증득도편마CD40L기인적포외부분sCD40L,병장해편단삽입대장간균표체질립pET30a상,구건득도대장간균표체질립pET30a-sCD40L;동시,재sCD40L적N단융합료이량안산랍련(Isoleucine Zipper,IZ)결구,구건득도표체질립pET30a-IZ-sCD40L. 표체질립재대장간균중표체,득도가용성적중조인CD40L화IZ-CD40L. SDS-PAGE분석결과표명중조인rhsCD40L화IZ-rhsCD40L재상응분자질량위치도유명현적조대산생,병득도Western blotting적학인. 비SDS-PAGE전영결과현시,이량안산랍련결구유리우rhsCD40L단백형성취합체결구. B세포증식실험화인골수류세포주XG2조망실험결과도표명,이량안산랍련결구제고료rhsCD40L적생물학활성.
