细胞生物学杂志
細胞生物學雜誌
세포생물학잡지
CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
2006年
1期
71-75
,共5页
李新鸣%孙黎光%刘萍%付玥%白抚生%宣忠信
李新鳴%孫黎光%劉萍%付玥%白撫生%宣忠信
리신명%손려광%류평%부모%백무생%선충신
WEB2基因%S期检查点%RNR3基因%酿酒酵母
WEB2基因%S期檢查點%RNR3基因%釀酒酵母
WEB2기인%S기검사점%RNR3기인%양주효모
WEB2基因参与酿酒酵母S期检查点调控机制,而RNR3基因位于该调控通路末端,DNA损伤或合成阻断时,S期检查点通路诱导RNR3过度表达.因此,通过确定WEB2在该检查点通路上是否参与调控RNR3基因的表达,将有助于进一步明确WEB2基因在检查点通路上的工作位点,了解WEB2基因如何发挥检查点调控功能.构建RNR3-LacZ基因融合质粒,用于检测酵母细胞内RNR3基因的诱导性.诱导性可以通过测定β-半乳糖苷酶的活性而得知.利用DNA损伤药物甲磺酸甲酯(MMS)及DNA合成阻断剂羟基脲(HU)处理酵母细胞,测定WEB2基因突变株和野生株细胞内RNR3基因的诱导性.结果,WEB2突变株细胞中诱导活性分别增加(8.27±0.38)倍和(9.55±0.24)倍,而野生株分别增加了(83.32±2.42)倍和(124.67±2.87)倍.反映RNR3基因在WEB2突变株中的诱导性低于野生株.同RAD53突变株相比,后者的RNR3基因的诱导性更低,仅为(2.37±0.18)倍和(2.91±0.13)倍.说明WEB2基因突变影响S期检查点通路的信号传递至RNR3基因,所以在酿酒酵母S期检查点通路上,WEB2工作在RNR3基因上游,参与调控RNR3的表达,但调控能力不如RAD53基因强.
WEB2基因參與釀酒酵母S期檢查點調控機製,而RNR3基因位于該調控通路末耑,DNA損傷或閤成阻斷時,S期檢查點通路誘導RNR3過度錶達.因此,通過確定WEB2在該檢查點通路上是否參與調控RNR3基因的錶達,將有助于進一步明確WEB2基因在檢查點通路上的工作位點,瞭解WEB2基因如何髮揮檢查點調控功能.構建RNR3-LacZ基因融閤質粒,用于檢測酵母細胞內RNR3基因的誘導性.誘導性可以通過測定β-半乳糖苷酶的活性而得知.利用DNA損傷藥物甲磺痠甲酯(MMS)及DNA閤成阻斷劑羥基脲(HU)處理酵母細胞,測定WEB2基因突變株和野生株細胞內RNR3基因的誘導性.結果,WEB2突變株細胞中誘導活性分彆增加(8.27±0.38)倍和(9.55±0.24)倍,而野生株分彆增加瞭(83.32±2.42)倍和(124.67±2.87)倍.反映RNR3基因在WEB2突變株中的誘導性低于野生株.同RAD53突變株相比,後者的RNR3基因的誘導性更低,僅為(2.37±0.18)倍和(2.91±0.13)倍.說明WEB2基因突變影響S期檢查點通路的信號傳遞至RNR3基因,所以在釀酒酵母S期檢查點通路上,WEB2工作在RNR3基因上遊,參與調控RNR3的錶達,但調控能力不如RAD53基因彊.
WEB2기인삼여양주효모S기검사점조공궤제,이RNR3기인위우해조공통로말단,DNA손상혹합성조단시,S기검사점통로유도RNR3과도표체.인차,통과학정WEB2재해검사점통로상시부삼여조공RNR3기인적표체,장유조우진일보명학WEB2기인재검사점통로상적공작위점,료해WEB2기인여하발휘검사점조공공능.구건RNR3-LacZ기인융합질립,용우검측효모세포내RNR3기인적유도성.유도성가이통과측정β-반유당감매적활성이득지.이용DNA손상약물갑광산갑지(MMS)급DNA합성조단제간기뇨(HU)처리효모세포,측정WEB2기인돌변주화야생주세포내RNR3기인적유도성.결과,WEB2돌변주세포중유도활성분별증가(8.27±0.38)배화(9.55±0.24)배,이야생주분별증가료(83.32±2.42)배화(124.67±2.87)배.반영RNR3기인재WEB2돌변주중적유도성저우야생주.동RAD53돌변주상비,후자적RNR3기인적유도성경저,부위(2.37±0.18)배화(2.91±0.13)배.설명WEB2기인돌변영향S기검사점통로적신호전체지RNR3기인,소이재양주효모S기검사점통로상,WEB2공작재RNR3기인상유,삼여조공RNR3적표체,단조공능력불여RAD53기인강.
