CAJ | 학술논문

目的:观察从骨髓来源的免疫辅佐细胞树突状细胞的培养操作技术及合理的培养时间.方法:实验于2003-10/2004-12在卫生部细胞移植重点实验室进行.树突细胞来源为健康SD大鼠的骨髓细胞,分别加入4种细胞因子:重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子5 μg/L,重组大鼠白细胞介素45 μg/L,重组大鼠肿瘤坏死因子α 10 μg/L,重组大鼠γ干扰素20μg/L,共培养2周.每隔2 d加细胞因子1次,保持各细胞因子的浓度不变,分离树突细胞采用"培养黏附法".在培养的第3天吸去上清后重新加入培养液,在培养2周后收获悬浮的树突状细胞,分离树突细胞采用"培养黏附法".在培养的第1,3,5,7,9,11,13,15天用光学倒置显微镜观察细胞的形态;取一部分细胞在培养的第7,11,13,15天行流式细胞仪检查,并用PE标记的抗大鼠CD86单克隆抗体检测它的成熟度(CD86单抗阳性为成熟).结果:①树突状细胞的形态:从培养第7天开始细胞周围开始逐渐伸出突起,第13天以后突起五六支左右,且长度逐渐缩短,成熟的树突状细胞伸出长短不等的突起,类似神经细胞的树突.②培养所得的树突状细胞数量:1只大鼠平均得到(1.18±0.21)×107.③树突状细胞的成熟度:培养第7,11,13,15天CD 86单抗的阳性率分别为30%,80%,92%,94%.结论:应用骨髓来源的树突状细胞,在两种常规的细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4基础上加入肿瘤坏死因子α和γ干扰素,培养2周,应用培养黏附法分离树突状细胞,可得到成熟的树突状细胞,且数量较多.
목적:관찰종골수래원적면역보좌세포수돌상세포적배양조작기술급합리적배양시간.방법:실험우2003-10/2004-12재위생부세포이식중점실험실진행.수돌세포래원위건강SD대서적골수세포,분별가입4충세포인자:중조대서립세포-거서세포집락자격인자5 μg/L,중조대서백세포개소45 μg/L,중조대서종류배사인자α 10 μg/L,중조대서γ간우소20μg/L,공배양2주.매격2 d가세포인자1차,보지각세포인자적농도불변,분리수돌세포채용"배양점부법".재배양적제3천흡거상청후중신가입배양액,재배양2주후수획현부적수돌상세포,분리수돌세포채용"배양점부법".재배양적제1,3,5,7,9,11,13,15천용광학도치현미경관찰세포적형태;취일부분세포재배양적제7,11,13,15천행류식세포의검사,병용PE표기적항대서CD86단극륭항체검측타적성숙도(CD86단항양성위성숙).결과:①수돌상세포적형태:종배양제7천개시세포주위개시축점신출돌기,제13천이후돌기오륙지좌우,차장도축점축단,성숙적수돌상세포신출장단불등적돌기,유사신경세포적수돌.②배양소득적수돌상세포수량:1지대서평균득도(1.18±0.21)×107.③수돌상세포적성숙도:배양제7,11,13,15천CD 86단항적양성솔분별위30%,80%,92%,94%.결론:응용골수래원적수돌상세포,재량충상규적세포인자립세포-거서세포집락자격인자화백세포개소4기출상가입종류배사인자α화γ간우소,배양2주,응용배양점부법분리수돌상세포,가득도성숙적수돌상세포,차수량교다.