华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2007年
2期
179-182
,共4页
黎培员%林菊生%冯作化%贺宇飞%周鹤俊%田德安
黎培員%林菊生%馮作化%賀宇飛%週鶴俊%田德安
려배원%림국생%풍작화%하우비%주학준%전덕안
内皮抑制素%Igκ信号肽%重组质粒%基因表达%内皮细胞
內皮抑製素%Igκ信號肽%重組質粒%基因錶達%內皮細胞
내피억제소%Igκ신호태%중조질립%기인표체%내피세포
目的 构建小鼠内皮抑制素(endostatin)真核表达质粒,进行分泌性表达,研究其体外生物学活性,以进一步用于肿瘤的基因治疗.方法 人工合成小鼠Igκ轻链信号肽序列,RT-PCR获得小鼠内皮抑制素编码序列,一起克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,对其进行酶切鉴定和序列分析.重组质粒经脂质体介导转染受体细胞BHK-21,ELISA检测细胞培养上清中内皮抑制素的含量.用此上清作用于经bFGF刺激的ECV304内皮细胞和HepG2肝癌细胞,MTT法检测细胞的增殖.结果 经酶切鉴定及DNA测序分析,Igκ信号肽序列及内皮抑制素编码序列成功克隆到目的位点上,其转染细胞上清中可以检测到分泌出的内皮抑制素,含量为(65.5±10.9)ng/106细胞;并且可以抑制ECV304内皮细胞的增殖,抑制率约为29.2%,而对HepG2肝癌细胞增殖没有影响.结论 成功构建了小鼠内皮抑制素真核质粒,其分泌性表达产物可以抑制内皮细胞的增殖,具有较好的生物学活性.
目的 構建小鼠內皮抑製素(endostatin)真覈錶達質粒,進行分泌性錶達,研究其體外生物學活性,以進一步用于腫瘤的基因治療.方法 人工閤成小鼠Igκ輕鏈信號肽序列,RT-PCR穫得小鼠內皮抑製素編碼序列,一起剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1中,對其進行酶切鑒定和序列分析.重組質粒經脂質體介導轉染受體細胞BHK-21,ELISA檢測細胞培養上清中內皮抑製素的含量.用此上清作用于經bFGF刺激的ECV304內皮細胞和HepG2肝癌細胞,MTT法檢測細胞的增殖.結果 經酶切鑒定及DNA測序分析,Igκ信號肽序列及內皮抑製素編碼序列成功剋隆到目的位點上,其轉染細胞上清中可以檢測到分泌齣的內皮抑製素,含量為(65.5±10.9)ng/106細胞;併且可以抑製ECV304內皮細胞的增殖,抑製率約為29.2%,而對HepG2肝癌細胞增殖沒有影響.結論 成功構建瞭小鼠內皮抑製素真覈質粒,其分泌性錶達產物可以抑製內皮細胞的增殖,具有較好的生物學活性.
목적 구건소서내피억제소(endostatin)진핵표체질립,진행분비성표체,연구기체외생물학활성,이진일보용우종류적기인치료.방법 인공합성소서Igκ경련신호태서렬,RT-PCR획득소서내피억제소편마서렬,일기극륭입진핵표체재체pcDNA3.1중,대기진행매절감정화서렬분석.중조질립경지질체개도전염수체세포BHK-21,ELISA검측세포배양상청중내피억제소적함량.용차상청작용우경bFGF자격적ECV304내피세포화HepG2간암세포,MTT법검측세포적증식.결과 경매절감정급DNA측서분석,Igκ신호태서렬급내피억제소편마서렬성공극륭도목적위점상,기전염세포상청중가이검측도분비출적내피억제소,함량위(65.5±10.9)ng/106세포;병차가이억제ECV304내피세포적증식,억제솔약위29.2%,이대HepG2간암세포증식몰유영향.결론 성공구건료소서내피억제소진핵질립,기분비성표체산물가이억제내피세포적증식,구유교호적생물학활성.
