第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2008年
6期
504-507
,共4页
夏桂枝%张国成%陈新民%洪新如
夏桂枝%張國成%陳新民%洪新如
하계지%장국성%진신민%홍신여
细胞生成素%胎血%间质干细胞%转染
細胞生成素%胎血%間質榦細胞%轉染
세포생성소%태혈%간질간세포%전염
目的: 构建人EPO基因真核表达载体并转染人脐血间充质干细胞,获得稳定表达人EPO的人脐血间充质干细胞.方法: 从人胎肝细胞中提取总RNA,经过RTPCR方法扩增人EPO全长cDNA,应用基因重组技术将EPO cDNA基因亚克隆至pcDNA3真核表达载体内,以酶切和测序方法鉴定重组质粒pcDNA3-EPO构建的正确性,再将pcDNA3-EPO经脂质体介导转染人脐血间充质干细胞,经G418筛选后获得稳定转染EPO基因的人脐血间充质干细胞,用RT-PCR,Western Blot和细胞免疫化学方法鉴定外源人EPO基因在人脐血间充质干细胞中的表达.结果: 酶切和测序结果均证实pcDNA3-EPO构建正确,RT-PCR,Western blot和细胞免疫化学结果显示转染人EPO基因的人脐血间充质干细胞体外能表达EPO.结论: 构建成功人EPO基因真核表达载体,转染人脐血间充质干细胞后在体外可获得稳定表达.
目的: 構建人EPO基因真覈錶達載體併轉染人臍血間充質榦細胞,穫得穩定錶達人EPO的人臍血間充質榦細胞.方法: 從人胎肝細胞中提取總RNA,經過RTPCR方法擴增人EPO全長cDNA,應用基因重組技術將EPO cDNA基因亞剋隆至pcDNA3真覈錶達載體內,以酶切和測序方法鑒定重組質粒pcDNA3-EPO構建的正確性,再將pcDNA3-EPO經脂質體介導轉染人臍血間充質榦細胞,經G418篩選後穫得穩定轉染EPO基因的人臍血間充質榦細胞,用RT-PCR,Western Blot和細胞免疫化學方法鑒定外源人EPO基因在人臍血間充質榦細胞中的錶達.結果: 酶切和測序結果均證實pcDNA3-EPO構建正確,RT-PCR,Western blot和細胞免疫化學結果顯示轉染人EPO基因的人臍血間充質榦細胞體外能錶達EPO.結論: 構建成功人EPO基因真覈錶達載體,轉染人臍血間充質榦細胞後在體外可穫得穩定錶達.
목적: 구건인EPO기인진핵표체재체병전염인제혈간충질간세포,획득은정표체인EPO적인제혈간충질간세포.방법: 종인태간세포중제취총RNA,경과RTPCR방법확증인EPO전장cDNA,응용기인중조기술장EPO cDNA기인아극륭지pcDNA3진핵표체재체내,이매절화측서방법감정중조질립pcDNA3-EPO구건적정학성,재장pcDNA3-EPO경지질체개도전염인제혈간충질간세포,경G418사선후획득은정전염EPO기인적인제혈간충질간세포,용RT-PCR,Western Blot화세포면역화학방법감정외원인EPO기인재인제혈간충질간세포중적표체.결과: 매절화측서결과균증실pcDNA3-EPO구건정학,RT-PCR,Western blot화세포면역화학결과현시전염인EPO기인적인제혈간충질간세포체외능표체EPO.결론: 구건성공인EPO기인진핵표체재체,전염인제혈간충질간세포후재체외가획득은정표체.
