中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2008年
2期
392-396
,共5页
邢艳平%岑溪南%童春容%顾江英%蔡鹏%陶秀艳%靳娴%朱平
邢豔平%岑溪南%童春容%顧江英%蔡鵬%陶秀豔%靳嫻%硃平
형염평%잠계남%동춘용%고강영%채붕%도수염%근한%주평
LMP2混合肽%树突状细胞%EB病毒感染%外周血单个核细胞%EB病毒抗原%T淋巴细胞
LMP2混閤肽%樹突狀細胞%EB病毒感染%外週血單箇覈細胞%EB病毒抗原%T淋巴細胞
LMP2혼합태%수돌상세포%EB병독감염%외주혈단개핵세포%EB병독항원%T림파세포
LMP2是EB病毒感染细胞后表达的一种蛋白.本研究探讨应用适于不同HLA分型的EB病毒-LMP2抗原混合肽(MIX-LMP2)体外刺激EB病毒感染患者外周血单个核细胞,诱导产生EB病毒抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL).取EB病毒相关噬血细胞综合症患者的外周血,分离并诱导培养树突状细胞,在培养过程中用EB病毒MIX-LMP2混合肽刺激,促成熟后在体外激活自体T淋巴细胞,每周刺激1次,共刺激2次;同时对部分分离的淋巴细胞在培养过程中不予以刺激作为对照.用基因扫描T细胞受体(TCR)β基因图谱的方法观察培养前后的T细胞克隆分布变化;用流式细胞术检测T淋巴细胞的表型变化;将培养的细胞和靶细胞共培养检测IFN-γ的分泌以研究CTL细胞抗原特异性的细胞毒作用.研究结果表明,基因扫描TCRβ基因结果显示体外培养改变了患者的TCRβ基因图谱,培养前为寡克隆的TCRB基因家族在培养后出现与正常人相似的多峰分布,提示淋巴细胞亚群分布恢复正常;流式细胞分析显示培养前的淋巴细胞CD3+、CD3+ CD8+、CD3+ CD45RA-CD45RO+ 比例分别为70.73%、42.99%、27.56%,用负载EB病毒LMP2肽2次刺激体外培养后,上述的淋巴细胞表型分别升高为95.17%、52.54%、81.41%.NK细胞(CD3-CD56%)、调节性T细胞(CD4+ CD25+ FOXP3+)比例变化不大,分别从培养前的2.12%,0.03%变化为2.35%,0.02%.CD3+ CD45RA-CD45RO+ 细胞增长比例较大,表明2次刺激后大部分的初始型T淋巴细胞被激活.IFN-γ分泌检测结果显示,当负载LMP2肽的DC细胞作为靶细胞时,刺激1次的细胞分泌IFN-γ量和刺激2次的细胞分泌IFN-γ量明显高于同期未刺激细胞分泌IFN-γ量(p<0.05).而对于未负载LMP2的DC细胞作为靶细胞时,IFN-γ检测结果则显示无统计学意义(p>0.05).结论:用负载EB病毒MIX-LMP2肽的树突状细胞(DC)刺激T淋巴细胞的培养方法,可以改变患者T淋巴细胞克隆分布,产生识剐EB病毒的特异性T淋巴细胞.
LMP2是EB病毒感染細胞後錶達的一種蛋白.本研究探討應用適于不同HLA分型的EB病毒-LMP2抗原混閤肽(MIX-LMP2)體外刺激EB病毒感染患者外週血單箇覈細胞,誘導產生EB病毒抗原特異性的細胞毒性T淋巴細胞(CTL).取EB病毒相關噬血細胞綜閤癥患者的外週血,分離併誘導培養樹突狀細胞,在培養過程中用EB病毒MIX-LMP2混閤肽刺激,促成熟後在體外激活自體T淋巴細胞,每週刺激1次,共刺激2次;同時對部分分離的淋巴細胞在培養過程中不予以刺激作為對照.用基因掃描T細胞受體(TCR)β基因圖譜的方法觀察培養前後的T細胞剋隆分佈變化;用流式細胞術檢測T淋巴細胞的錶型變化;將培養的細胞和靶細胞共培養檢測IFN-γ的分泌以研究CTL細胞抗原特異性的細胞毒作用.研究結果錶明,基因掃描TCRβ基因結果顯示體外培養改變瞭患者的TCRβ基因圖譜,培養前為寡剋隆的TCRB基因傢族在培養後齣現與正常人相似的多峰分佈,提示淋巴細胞亞群分佈恢複正常;流式細胞分析顯示培養前的淋巴細胞CD3+、CD3+ CD8+、CD3+ CD45RA-CD45RO+ 比例分彆為70.73%、42.99%、27.56%,用負載EB病毒LMP2肽2次刺激體外培養後,上述的淋巴細胞錶型分彆升高為95.17%、52.54%、81.41%.NK細胞(CD3-CD56%)、調節性T細胞(CD4+ CD25+ FOXP3+)比例變化不大,分彆從培養前的2.12%,0.03%變化為2.35%,0.02%.CD3+ CD45RA-CD45RO+ 細胞增長比例較大,錶明2次刺激後大部分的初始型T淋巴細胞被激活.IFN-γ分泌檢測結果顯示,噹負載LMP2肽的DC細胞作為靶細胞時,刺激1次的細胞分泌IFN-γ量和刺激2次的細胞分泌IFN-γ量明顯高于同期未刺激細胞分泌IFN-γ量(p<0.05).而對于未負載LMP2的DC細胞作為靶細胞時,IFN-γ檢測結果則顯示無統計學意義(p>0.05).結論:用負載EB病毒MIX-LMP2肽的樹突狀細胞(DC)刺激T淋巴細胞的培養方法,可以改變患者T淋巴細胞剋隆分佈,產生識剮EB病毒的特異性T淋巴細胞.
LMP2시EB병독감염세포후표체적일충단백.본연구탐토응용괄우불동HLA분형적EB병독-LMP2항원혼합태(MIX-LMP2)체외자격EB병독감염환자외주혈단개핵세포,유도산생EB병독항원특이성적세포독성T림파세포(CTL).취EB병독상관서혈세포종합증환자적외주혈,분리병유도배양수돌상세포,재배양과정중용EB병독MIX-LMP2혼합태자격,촉성숙후재체외격활자체T림파세포,매주자격1차,공자격2차;동시대부분분리적림파세포재배양과정중불여이자격작위대조.용기인소묘T세포수체(TCR)β기인도보적방법관찰배양전후적T세포극륭분포변화;용류식세포술검측T림파세포적표형변화;장배양적세포화파세포공배양검측IFN-γ적분비이연구CTL세포항원특이성적세포독작용.연구결과표명,기인소묘TCRβ기인결과현시체외배양개변료환자적TCRβ기인도보,배양전위과극륭적TCRB기인가족재배양후출현여정상인상사적다봉분포,제시림파세포아군분포회복정상;류식세포분석현시배양전적림파세포CD3+、CD3+ CD8+、CD3+ CD45RA-CD45RO+ 비례분별위70.73%、42.99%、27.56%,용부재EB병독LMP2태2차자격체외배양후,상술적림파세포표형분별승고위95.17%、52.54%、81.41%.NK세포(CD3-CD56%)、조절성T세포(CD4+ CD25+ FOXP3+)비례변화불대,분별종배양전적2.12%,0.03%변화위2.35%,0.02%.CD3+ CD45RA-CD45RO+ 세포증장비례교대,표명2차자격후대부분적초시형T림파세포피격활.IFN-γ분비검측결과현시,당부재LMP2태적DC세포작위파세포시,자격1차적세포분비IFN-γ량화자격2차적세포분비IFN-γ량명현고우동기미자격세포분비IFN-γ량(p<0.05).이대우미부재LMP2적DC세포작위파세포시,IFN-γ검측결과칙현시무통계학의의(p>0.05).결론:용부재EB병독MIX-LMP2태적수돌상세포(DC)자격T림파세포적배양방법,가이개변환자T림파세포극륭분포,산생식과EB병독적특이성T림파세포.
