世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2009年
32期
3283-3291
,共9页
苏思标%姜海行%王东旭%覃山羽%梁梓宇
囌思標%薑海行%王東旭%覃山羽%樑梓宇
소사표%강해행%왕동욱%담산우%량재우
骨髓间充质干细胞%肝星状细胞%RhoA%P27%细胞周期
骨髓間充質榦細胞%肝星狀細胞%RhoA%P27%細胞週期
골수간충질간세포%간성상세포%RhoA%P27%세포주기
目的:观察体外大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对肝星状细胞(HSCs)RhoA信号因子及其细胞周期调控因子P27表达的影响,探讨MSCs调控HSCs细胞周期G1/S转换机制.方法:贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠MSCs,传代至第4代使用;大鼠肝星状细胞(HSC-T6)系及纤维原细胞系冻融后传代使用.应用6孔塑料细胞培养盒,每孔使用半透膜(transwellinsert)建立上下双层细胞共培养体系,常规培养.实验分3组:空白对照组、阴性对照组、MSCs实验组.用WST-8法对HSCs增殖率进行测定:流式细胞仪检测细胞周期:RT-PCR、Western blot检测MSCs与HSCs共培养后HSCs内RhoA,P27 mRNA和蛋白的表达.结果:(1)HSCs与MSCs共培养24 h后,HSCs表现明显增殖抑制(P<0.01),且呈现时间依赖性,MSCs实验组与空白对照组、阴性对照组比较均有显著性差异(均P<0.01).(2)共培养12 h后,MSCs可阻滞HSCs由G0G1期向S期转换,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,与空白对照组、阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),(3)共培养12 h后,MSCs实验组RhoAmRNA表达与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(P<0.05,P<0.01),随时间的延长呈递减趋势;共培养后,MSCs实验组P27mRNA表达与空白对照组、阴性对照组比较均无统计学差异.(4)共培养12 h后,MSCs实验组RhoA蛋白表达与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(均P<0.01),随时间的延长呈递减趋势:共培养12 h后,MSCs实验组P27蛋白与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(均P<0.01),随时间的延长呈递增趋势.(5)相关性分析显示:RhoA与P27mRNA的表达无明显相关(r=0.105);RhoA与P27蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.943,P<0.01).结论:MSCs抑制HSCs增殖的机制可能是通过RhoA-P27通路调控HSCs细胞周期改变;RhoA活性的下调可能是引起HSCs内P27蛋白表达增加的原因.
目的:觀察體外大鼠骨髓間充質榦細胞(MSCs)對肝星狀細胞(HSCs)RhoA信號因子及其細胞週期調控因子P27錶達的影響,探討MSCs調控HSCs細胞週期G1/S轉換機製.方法:貼壁篩選法培養、純化SD大鼠MSCs,傳代至第4代使用;大鼠肝星狀細胞(HSC-T6)繫及纖維原細胞繫凍融後傳代使用.應用6孔塑料細胞培養盒,每孔使用半透膜(transwellinsert)建立上下雙層細胞共培養體繫,常規培養.實驗分3組:空白對照組、陰性對照組、MSCs實驗組.用WST-8法對HSCs增殖率進行測定:流式細胞儀檢測細胞週期:RT-PCR、Western blot檢測MSCs與HSCs共培養後HSCs內RhoA,P27 mRNA和蛋白的錶達.結果:(1)HSCs與MSCs共培養24 h後,HSCs錶現明顯增殖抑製(P<0.01),且呈現時間依賴性,MSCs實驗組與空白對照組、陰性對照組比較均有顯著性差異(均P<0.01).(2)共培養12 h後,MSCs可阻滯HSCs由G0G1期嚮S期轉換,使G0/G1期細胞增多,S期細胞減少,與空白對照組、陰性對照組比較差異均有統計學意義(P<0.01),(3)共培養12 h後,MSCs實驗組RhoAmRNA錶達與空白對照組、陰性對照組比較均有統計學差異(P<0.05,P<0.01),隨時間的延長呈遞減趨勢;共培養後,MSCs實驗組P27mRNA錶達與空白對照組、陰性對照組比較均無統計學差異.(4)共培養12 h後,MSCs實驗組RhoA蛋白錶達與空白對照組、陰性對照組比較均有統計學差異(均P<0.01),隨時間的延長呈遞減趨勢:共培養12 h後,MSCs實驗組P27蛋白與空白對照組、陰性對照組比較均有統計學差異(均P<0.01),隨時間的延長呈遞增趨勢.(5)相關性分析顯示:RhoA與P27mRNA的錶達無明顯相關(r=0.105);RhoA與P27蛋白的錶達呈顯著負相關(r=-0.943,P<0.01).結論:MSCs抑製HSCs增殖的機製可能是通過RhoA-P27通路調控HSCs細胞週期改變;RhoA活性的下調可能是引起HSCs內P27蛋白錶達增加的原因.
목적:관찰체외대서골수간충질간세포(MSCs)대간성상세포(HSCs)RhoA신호인자급기세포주기조공인자P27표체적영향,탐토MSCs조공HSCs세포주기G1/S전환궤제.방법:첩벽사선법배양、순화SD대서MSCs,전대지제4대사용;대서간성상세포(HSC-T6)계급섬유원세포계동융후전대사용.응용6공소료세포배양합,매공사용반투막(transwellinsert)건립상하쌍층세포공배양체계,상규배양.실험분3조:공백대조조、음성대조조、MSCs실험조.용WST-8법대HSCs증식솔진행측정:류식세포의검측세포주기:RT-PCR、Western blot검측MSCs여HSCs공배양후HSCs내RhoA,P27 mRNA화단백적표체.결과:(1)HSCs여MSCs공배양24 h후,HSCs표현명현증식억제(P<0.01),차정현시간의뢰성,MSCs실험조여공백대조조、음성대조조비교균유현저성차이(균P<0.01).(2)공배양12 h후,MSCs가조체HSCs유G0G1기향S기전환,사G0/G1기세포증다,S기세포감소,여공백대조조、음성대조조비교차이균유통계학의의(P<0.01),(3)공배양12 h후,MSCs실험조RhoAmRNA표체여공백대조조、음성대조조비교균유통계학차이(P<0.05,P<0.01),수시간적연장정체감추세;공배양후,MSCs실험조P27mRNA표체여공백대조조、음성대조조비교균무통계학차이.(4)공배양12 h후,MSCs실험조RhoA단백표체여공백대조조、음성대조조비교균유통계학차이(균P<0.01),수시간적연장정체감추세:공배양12 h후,MSCs실험조P27단백여공백대조조、음성대조조비교균유통계학차이(균P<0.01),수시간적연장정체증추세.(5)상관성분석현시:RhoA여P27mRNA적표체무명현상관(r=0.105);RhoA여P27단백적표체정현저부상관(r=-0.943,P<0.01).결론:MSCs억제HSCs증식적궤제가능시통과RhoA-P27통로조공HSCs세포주기개변;RhoA활성적하조가능시인기HSCs내P27단백표체증가적원인.
