微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2012年
1期
15-19
,共5页
朱传凤%陈汉泉%余黎%周旭
硃傳鳳%陳漢泉%餘黎%週旭
주전봉%진한천%여려%주욱
呼吸道合胞病毒%兰州株%融合蛋白(F)%表达
呼吸道閤胞病毒%蘭州株%融閤蛋白(F)%錶達
호흡도합포병독%란주주%융합단백(F)%표체
目的 克隆并表达人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州株的融合蛋白(F)基因片段.方法 利用PCR技术扩增HRSV兰州株的融合蛋白基因片段,克隆于原核表达载体pET-42b(+),转化大肠杆菌(Rosetta),经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化,SDS-PAGE和Western-blot分析重组蛋白的表达及其反应原性.结果 PCR扩增得到951 bp的DNA片段,重组质粒pET42b-F经酶切鉴定和测序分析,表明质粒构建正确.表达的重组蛋白的相对分子质量为68 710,表达的重组蛋白占总菌体蛋白的7％,纯化后蛋白纯度达80％.经Western-blot分析,重组蛋白与抗RSV的单抗呈专一性强阳性反应.结论 成功构建了HRSV兰州株F基因片段原核表达载体,并在大肠杆菌Rosetta中获得了表达,表达的重组蛋白具有反应原性和特异性,为HRSV感染引起的疾病血清学诊断以及试剂盒的研发提供了材料.
目的 剋隆併錶達人呼吸道閤胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)蘭州株的融閤蛋白(F)基因片段.方法 利用PCR技術擴增HRSV蘭州株的融閤蛋白基因片段,剋隆于原覈錶達載體pET-42b(+),轉化大腸桿菌(Rosetta),經IPTG誘導錶達,鎳離子親和層析柱純化,SDS-PAGE和Western-blot分析重組蛋白的錶達及其反應原性.結果 PCR擴增得到951 bp的DNA片段,重組質粒pET42b-F經酶切鑒定和測序分析,錶明質粒構建正確.錶達的重組蛋白的相對分子質量為68 710,錶達的重組蛋白佔總菌體蛋白的7％,純化後蛋白純度達80％.經Western-blot分析,重組蛋白與抗RSV的單抗呈專一性彊暘性反應.結論 成功構建瞭HRSV蘭州株F基因片段原覈錶達載體,併在大腸桿菌Rosetta中穫得瞭錶達,錶達的重組蛋白具有反應原性和特異性,為HRSV感染引起的疾病血清學診斷以及試劑盒的研髮提供瞭材料.
목적 극륭병표체인호흡도합포병독(Human respiratory syncytial virus,HRSV)란주주적융합단백(F)기인편단.방법 이용PCR기술확증HRSV란주주적융합단백기인편단,극륭우원핵표체재체pET-42b(+),전화대장간균(Rosetta),경IPTG유도표체,얼리자친화층석주순화,SDS-PAGE화Western-blot분석중조단백적표체급기반응원성.결과 PCR확증득도951 bp적DNA편단,중조질립pET42b-F경매절감정화측서분석,표명질립구건정학.표체적중조단백적상대분자질량위68 710,표체적중조단백점총균체단백적7％,순화후단백순도체80％.경Western-blot분석,중조단백여항RSV적단항정전일성강양성반응.결론 성공구건료HRSV란주주F기인편단원핵표체재체,병재대장간균Rosetta중획득료표체,표체적중조단백구유반응원성화특이성,위HRSV감염인기적질병혈청학진단이급시제합적연발제공료재료.
