生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2005年
4期
331-335
,共5页
杞少华%彭芳芳%张百芳%沈晗%吴少波%武栋成
杞少華%彭芳芳%張百芳%瀋晗%吳少波%武棟成
기소화%팽방방%장백방%침함%오소파%무동성
小窝蛋白-1%基因表达%293T细胞
小窩蛋白-1%基因錶達%293T細胞
소와단백-1%기인표체%293T세포
构建重组真核表达质粒PHLCX Nflag3/小窝蛋白-1,并在293T细胞中表达.用PCR的方法扩增cDNA文库中的人小窝蛋白-1基因,连接在真核表达载体PHLCX Nflag3的短肽标签flag的下游,用限制性酶切和测序的方法鉴定;将重组质粒以脂质体法转染293T细胞,Western blotting法检测蛋白质的表达.结果显示,双酶切出现两个片段,分别与空载体和人小窝蛋白-1的cDNA分子质量大小相符,测序结果符合人小窝蛋白-1的cDNA序列;Western blotting显示构建的新载体能够在293T细胞中表达小窝蛋白-1/flag融合蛋白,表明已成功构建了能在293T细胞中高效表达小窝蛋白-1/flag融合蛋白的真核表达载体PLHCX Nflag3/小窝蛋白-1.
構建重組真覈錶達質粒PHLCX Nflag3/小窩蛋白-1,併在293T細胞中錶達.用PCR的方法擴增cDNA文庫中的人小窩蛋白-1基因,連接在真覈錶達載體PHLCX Nflag3的短肽標籤flag的下遊,用限製性酶切和測序的方法鑒定;將重組質粒以脂質體法轉染293T細胞,Western blotting法檢測蛋白質的錶達.結果顯示,雙酶切齣現兩箇片段,分彆與空載體和人小窩蛋白-1的cDNA分子質量大小相符,測序結果符閤人小窩蛋白-1的cDNA序列;Western blotting顯示構建的新載體能夠在293T細胞中錶達小窩蛋白-1/flag融閤蛋白,錶明已成功構建瞭能在293T細胞中高效錶達小窩蛋白-1/flag融閤蛋白的真覈錶達載體PLHCX Nflag3/小窩蛋白-1.
구건중조진핵표체질립PHLCX Nflag3/소와단백-1,병재293T세포중표체.용PCR적방법확증cDNA문고중적인소와단백-1기인,련접재진핵표체재체PHLCX Nflag3적단태표첨flag적하유,용한제성매절화측서적방법감정;장중조질립이지질체법전염293T세포,Western blotting법검측단백질적표체.결과현시,쌍매절출현량개편단,분별여공재체화인소와단백-1적cDNA분자질량대소상부,측서결과부합인소와단백-1적cDNA서렬;Western blotting현시구건적신재체능구재293T세포중표체소와단백-1/flag융합단백,표명이성공구건료능재293T세포중고효표체소와단백-1/flag융합단백적진핵표체재체PLHCX Nflag3/소와단백-1.
