肿瘤预防与治疗
腫瘤預防與治療
종류예방여치료
JOURNAL OF CANCER CONTROL AND TREATMENT
2009年
2期
135-138,后插1
,共5页
张文彬%陈廷清%黄建鸣%查晓
張文彬%陳廷清%黃建鳴%查曉
장문빈%진정청%황건명%사효
GM-CSF%Survivin%融合基因%树突状细胞
GM-CSF%Survivin%融閤基因%樹突狀細胞
GM-CSF%Survivin%융합기인%수돌상세포
目的:构建以Survivin为肿瘤抗原,GM-CSF为基因佐剂的融合基因,并将该融合基因转入DC,研究DC疫苗抗肿瘤治疗的新方法.方法:参照GenBank收载的Survivin基因序列设计引物,提取HT-29肿瘤细胞中的mRNA,经RT-PCR反应获得野生型Survivin cDNA基因片段.人工合成GM-CSF、Survivin两端和中间连接接头引物.PCR反应获得GM-CSF、Survivin DNA片段.经BamHⅠ酶切,T4DNA连接酶连接获得GM-CSF-Survlvin融合DNA.以此DNA为模板,用两端引物作PCR扩增以获得较纯的融合DNA片段.经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后与相同双酶切的pcDNA3.1(-)载体质粒混合,加入T4DNA连接酶,16℃连接20h.用连接物转化大肠杆菌DHSα,挑选克隆提取质粒.结果:经PCR和限制性内切酶酶切初步鉴定后,选取一株送样作DNA序列测定,结果与设计序列完全一致.质粒定名为pcGM-Sur,用jetPEITM-Macrophage转染体系,将构建的pcGM-Sur质粒转染DC.采用RT-PCR和Western blot检测到DC中的融合基因mRNA和表达的Survivin抗原.结论:质粒pcGM-Sur DNA序列与设计完全一致,转染DC后能转录出完整的融合基因mRNA并表达出具有Survivin抗原性的融合蛋白.
目的:構建以Survivin為腫瘤抗原,GM-CSF為基因佐劑的融閤基因,併將該融閤基因轉入DC,研究DC疫苗抗腫瘤治療的新方法.方法:參照GenBank收載的Survivin基因序列設計引物,提取HT-29腫瘤細胞中的mRNA,經RT-PCR反應穫得野生型Survivin cDNA基因片段.人工閤成GM-CSF、Survivin兩耑和中間連接接頭引物.PCR反應穫得GM-CSF、Survivin DNA片段.經BamHⅠ酶切,T4DNA連接酶連接穫得GM-CSF-Survlvin融閤DNA.以此DNA為模闆,用兩耑引物作PCR擴增以穫得較純的融閤DNA片段.經EcoRⅠ、HindⅢ雙酶切後與相同雙酶切的pcDNA3.1(-)載體質粒混閤,加入T4DNA連接酶,16℃連接20h.用連接物轉化大腸桿菌DHSα,挑選剋隆提取質粒.結果:經PCR和限製性內切酶酶切初步鑒定後,選取一株送樣作DNA序列測定,結果與設計序列完全一緻.質粒定名為pcGM-Sur,用jetPEITM-Macrophage轉染體繫,將構建的pcGM-Sur質粒轉染DC.採用RT-PCR和Western blot檢測到DC中的融閤基因mRNA和錶達的Survivin抗原.結論:質粒pcGM-Sur DNA序列與設計完全一緻,轉染DC後能轉錄齣完整的融閤基因mRNA併錶達齣具有Survivin抗原性的融閤蛋白.
목적:구건이Survivin위종류항원,GM-CSF위기인좌제적융합기인,병장해융합기인전입DC,연구DC역묘항종류치료적신방법.방법:삼조GenBank수재적Survivin기인서렬설계인물,제취HT-29종류세포중적mRNA,경RT-PCR반응획득야생형Survivin cDNA기인편단.인공합성GM-CSF、Survivin량단화중간련접접두인물.PCR반응획득GM-CSF、Survivin DNA편단.경BamHⅠ매절,T4DNA련접매련접획득GM-CSF-Survlvin융합DNA.이차DNA위모판,용량단인물작PCR확증이획득교순적융합DNA편단.경EcoRⅠ、HindⅢ쌍매절후여상동쌍매절적pcDNA3.1(-)재체질립혼합,가입T4DNA련접매,16℃련접20h.용련접물전화대장간균DHSα,도선극륭제취질립.결과:경PCR화한제성내절매매절초보감정후,선취일주송양작DNA서렬측정,결과여설계서렬완전일치.질립정명위pcGM-Sur,용jetPEITM-Macrophage전염체계,장구건적pcGM-Sur질립전염DC.채용RT-PCR화Western blot검측도DC중적융합기인mRNA화표체적Survivin항원.결론:질립pcGM-Sur DNA서렬여설계완전일치,전염DC후능전록출완정적융합기인mRNA병표체출구유Survivin항원성적융합단백.
