CAJ | 학술논문

采用基因克隆技术获取草鱼(Ctenopharyngodon idellus)细胞色素P450 3A(CYP3A)cDNA序列长1 849 bp,包含完整开放阅读框(open reading frame,ORF)1 542 bp,1个终止密码和含polyA信号3'UTR； ORF编码514个氨基酸,含信号肽(29 aa),2个跨膜螺旋区(23 aa,23 aa),血红素结合域(21 aa)和6个底物识别位点(SRSl-6)；与其他脊椎动物CYP3A氨基酸序列相似度达60％～ 92％.用实时定量PCR和分光光度计法分别研究了草鱼肾细胞系(Ctenopharyngodon idellus kidney cell line CIK)中利福平(rifampicin,RIF)诱导CYP3A基因表达和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)活性,采用红霉素脱甲基酶活性法测定CYP3A的活性.结果显示,诱导组CIK细胞中CYP3A mRNA表达量在8最高,而CYP3A酶活在10h最高；CYP3A mRNA和酶活性与对照组均具显著差异性（P<0.05）.CYP3A转录水平先于相应酶活变化表达,且转录水平表达显著高于酶活性,这很可能反映了RIF对CYP3A的诱导主要作用于转录水平而不直接作用于酶活,本研究旨为药物对CYP3A转录调控和活性调节提供科学依据,并为渔药代谢酶的研究提供理论依据.
채용기인극륭기술획취초어(Ctenopharyngodon idellus)세포색소P450 3A(CYP3A)cDNA서렬장1 849 bp,포함완정개방열독광(open reading frame,ORF)1 542 bp,1개종지밀마화함polyA신호3'UTR； ORF편마514개안기산,함신호태(29 aa),2개과막라선구(23 aa,23 aa),혈홍소결합역(21 aa)화6개저물식별위점(SRSl-6)；여기타척추동물CYP3A안기산서렬상사도체60％～ 92％.용실시정량PCR화분광광도계법분별연구료초어신세포계(Ctenopharyngodon idellus kidney cell line CIK)중리복평(rifampicin,RIF)유도CYP3A기인표체화홍매소-N-탈갑기매(ERND)활성,채용홍매소탈갑기매활성법측정CYP3A적활성.결과현시,유도조CIK세포중CYP3A mRNA표체량재8최고,이CYP3A매활재10h최고；CYP3A mRNA화매활성여대조조균구현저차이성（P<0.05）.CYP3A전록수평선우상응매활변화표체,차전록수평표체현저고우매활성,저흔가능반영료RIF대CYP3A적유도주요작용우전록수평이불직접작용우매활,본연구지위약물대CYP3A전록조공화활성조절제공과학의거,병위어약대사매적연구제공이론의거.