CAJ | 학술논문

本研究应用蛋白质组学方法比较白血病K562细胞及其耐阿霉素的K562/A02细胞中蛋白质表达谱的差异,筛选新的耐药相关蛋白.利用荧光差异双向电泳(2D-DIGE)技术分离K562细胞及K562/A02细胞的总蛋白,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( MALDI-TOF/MS)对差异表达蛋白质点进行鉴定,搜索蛋白质数据库,获得差异蛋白质的信息,并用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR法在蛋白质水平和mRNA水平对差异蛋白质进行验证.结果显示,经过DIGE技术和质谱分析,鉴定出8个蛋白质在耐阿霉素的K562细胞中表达有差异,其中2个表达下调,6个表达上调,它们分别参与细胞能量代谢、细胞增殖、细胞凋亡、细胞信号转导和基因转录等.在表达上调的蛋白中挑选Stathmin和CrkL蛋白,在K562及其耐药细胞株中进行了蛋白免疫印迹实验,结果与双向电泳结果一致;实时荧光定量PCR显示,CrkL在mRNA水平变化与在蛋白质水平变化一致,而Stathmin在mRNA水平变化与蛋白质水平变化不完全一致.结论:白血病K562细胞及其耐阿霉素K562/A02细胞蛋白质表达谱有差异,Stathmin和CrkL蛋白可能与耐药有关,值得进一步探讨.
본연구응용단백질조학방법비교백혈병K562세포급기내아매소적K562/A02세포중단백질표체보적차이,사선신적내약상관단백.이용형광차이쌍향전영(2D-DIGE)기술분리K562세포급K562/A02세포적총단백,용기질보조격광해흡전리비행시간질보( MALDI-TOF/MS)대차이표체단백질점진행감정,수색단백질수거고,획득차이단백질적신식,병용단백면역인적법화실시형광정량PCR법재단백질수평화mRNA수평대차이단백질진행험증.결과현시,경과DIGE기술화질보분석,감정출8개단백질재내아매소적K562세포중표체유차이,기중2개표체하조,6개표체상조,타문분별삼여세포능량대사、세포증식、세포조망、세포신호전도화기인전록등.재표체상조적단백중도선Stathmin화CrkL단백,재K562급기내약세포주중진행료단백면역인적실험,결과여쌍향전영결과일치;실시형광정량PCR현시,CrkL재mRNA수평변화여재단백질수평변화일치,이Stathmin재mRNA수평변화여단백질수평변화불완전일치.결론:백혈병K562세포급기내아매소K562/A02세포단백질표체보유차이,Stathmin화CrkL단백가능여내약유관,치득진일보탐토.