实验室研究与探索
實驗室研究與探索
실험실연구여탐색
LAABORATORY REESEARCH AND EXPLORATION
2011年
10期
14-18,27
,共6页
张勇%蒋泓%邓廷贤%粟文俊%杨莉珊%唐冬生
張勇%蔣泓%鄧廷賢%粟文俊%楊莉珊%唐鼕生
장용%장홍%산정현%속문준%양리산%당동생
锌指核酸酶%锌指蛋白%连接体%间隔体%FokⅠ切割域
鋅指覈痠酶%鋅指蛋白%連接體%間隔體%FokⅠ切割域
자지핵산매%자지단백%련접체%간격체%FokⅠ절할역
以电子设计用于猪的多位点基因打靶的人工锌指核酸酶为例,探索如何电子设计优化理想的人工锌指核酸酶,以减少人工锌指核酸酶的毒性采用OPEN电子设计方法,生物信息学方法的预测分析ZFP的立体结构,设计优化合适的连接体和间隔体组合,并通过突变优化FokⅠ异源二聚体 采用OPEN法设计三指ZF序列,并连接为ZFP序列,设计出长度为6 bp且富含AT碱基的spacer,加上长度为4个氨基酸残基的inter-domain linker,连接Fok Ⅰ切割结构域双突变子异源二聚体,并通过各种软件工具对ZFN的空间结构进行模拟预测,所设计得到的ZFN的有效率超过50％.探索获得电子设计理想ZFN的方案,即特异性结合DNA的锌指蛋白、最佳的linker和spacer的长度与组合以及优化的特异性切割的FokⅠ异源二聚体切割结构域.
以電子設計用于豬的多位點基因打靶的人工鋅指覈痠酶為例,探索如何電子設計優化理想的人工鋅指覈痠酶,以減少人工鋅指覈痠酶的毒性採用OPEN電子設計方法,生物信息學方法的預測分析ZFP的立體結構,設計優化閤適的連接體和間隔體組閤,併通過突變優化FokⅠ異源二聚體 採用OPEN法設計三指ZF序列,併連接為ZFP序列,設計齣長度為6 bp且富含AT堿基的spacer,加上長度為4箇氨基痠殘基的inter-domain linker,連接Fok Ⅰ切割結構域雙突變子異源二聚體,併通過各種軟件工具對ZFN的空間結構進行模擬預測,所設計得到的ZFN的有效率超過50％.探索穫得電子設計理想ZFN的方案,即特異性結閤DNA的鋅指蛋白、最佳的linker和spacer的長度與組閤以及優化的特異性切割的FokⅠ異源二聚體切割結構域.
이전자설계용우저적다위점기인타파적인공자지핵산매위례,탐색여하전자설계우화이상적인공자지핵산매,이감소인공자지핵산매적독성채용OPEN전자설계방법,생물신식학방법적예측분석ZFP적입체결구,설계우화합괄적련접체화간격체조합,병통과돌변우화FokⅠ이원이취체 채용OPEN법설계삼지ZF서렬,병련접위ZFP서렬,설계출장도위6 bp차부함AT감기적spacer,가상장도위4개안기산잔기적inter-domain linker,련접Fok Ⅰ절할결구역쌍돌변자이원이취체,병통과각충연건공구대ZFN적공간결구진행모의예측,소설계득도적ZFN적유효솔초과50％.탐색획득전자설계이상ZFN적방안,즉특이성결합DNA적자지단백、최가적linker화spacer적장도여조합이급우화적특이성절할적FokⅠ이원이취체절할결구역.
