农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2012年
1期
38-47
,共10页
王丰青%张重义%童治军%魏荷%吴为人
王豐青%張重義%童治軍%魏荷%吳為人
왕봉청%장중의%동치군%위하%오위인
双分子荧光互补(BiFC)%烟草%中介体亚基%互作
雙分子熒光互補(BiFC)%煙草%中介體亞基%互作
쌍분자형광호보(BiFC)%연초%중개체아기%호작
中介体是一种大分子蛋白复合物,中介体亚基之间的相互作用是中介体复合物在真核生物的转录调控中发挥作用的基础.本研究利用同源搜索,克隆了烟草(Nicotiana tabacum)中介体亚基基因NtMed6、NtMed18和NtMed21,测序结果表明NtMed6、NtMed18和NtMed21与拟南芥(Arab idopsis thaliana)中介体同源基因的序列一致性分别为69.46％、76.91％和77.01％.通过筛选适宜的侵染培养基优化了农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达进行亚细胞定位方法,分析了linker序列对亚细胞定位结果的影响.发现以YEB+100mmol/L AS和AA+100 mmol/L AS为侵染培养基时荧光强度大,并且表达荧光的细胞多；构建融合表达载体时添加5个氨基酸编码序列的linker提高了融合蛋白亚细胞定位结果的可靠性.烟草中介体亚基亚细胞定位表明,NtMed8、NtMed 18、NtMed6和NtMed21定位在细胞核和细胞质内,但主要在细胞核里.为进一步证实NtMed8属于烟草中介体亚基,同时研究NtMed8与其它亚基的相互作用,构建了35S驱动的含有EYFPN-端1-173氨基酸和C-端151-238氨基酸编码序列标签的融合表达载体(pNYE和pCYE).把NtMed8、NtMed18、NtMed6和NtMed21的全长ORF亚克隆到相应的载体上,共转化烟草(Nicotiana benthamiana)叶片,结果表明,NtMed8与NtMed 18存在互作,同时还观察到NtMed8与NtMed6的互作以及NtMed 18与NtMed6的互作.BiFC用于检测蛋白之间的互作是一种快捷有效的方法,能够应用于中介体亚基之间结构联系的研究.
中介體是一種大分子蛋白複閤物,中介體亞基之間的相互作用是中介體複閤物在真覈生物的轉錄調控中髮揮作用的基礎.本研究利用同源搜索,剋隆瞭煙草(Nicotiana tabacum)中介體亞基基因NtMed6、NtMed18和NtMed21,測序結果錶明NtMed6、NtMed18和NtMed21與擬南芥(Arab idopsis thaliana)中介體同源基因的序列一緻性分彆為69.46％、76.91％和77.01％.通過篩選適宜的侵染培養基優化瞭農桿菌介導的煙草葉片瞬時錶達進行亞細胞定位方法,分析瞭linker序列對亞細胞定位結果的影響.髮現以YEB+100mmol/L AS和AA+100 mmol/L AS為侵染培養基時熒光彊度大,併且錶達熒光的細胞多；構建融閤錶達載體時添加5箇氨基痠編碼序列的linker提高瞭融閤蛋白亞細胞定位結果的可靠性.煙草中介體亞基亞細胞定位錶明,NtMed8、NtMed 18、NtMed6和NtMed21定位在細胞覈和細胞質內,但主要在細胞覈裏.為進一步證實NtMed8屬于煙草中介體亞基,同時研究NtMed8與其它亞基的相互作用,構建瞭35S驅動的含有EYFPN-耑1-173氨基痠和C-耑151-238氨基痠編碼序列標籤的融閤錶達載體(pNYE和pCYE).把NtMed8、NtMed18、NtMed6和NtMed21的全長ORF亞剋隆到相應的載體上,共轉化煙草(Nicotiana benthamiana)葉片,結果錶明,NtMed8與NtMed 18存在互作,同時還觀察到NtMed8與NtMed6的互作以及NtMed 18與NtMed6的互作.BiFC用于檢測蛋白之間的互作是一種快捷有效的方法,能夠應用于中介體亞基之間結構聯繫的研究.
중개체시일충대분자단백복합물,중개체아기지간적상호작용시중개체복합물재진핵생물적전록조공중발휘작용적기출.본연구이용동원수색,극륭료연초(Nicotiana tabacum)중개체아기기인NtMed6、NtMed18화NtMed21,측서결과표명NtMed6、NtMed18화NtMed21여의남개(Arab idopsis thaliana)중개체동원기인적서렬일치성분별위69.46％、76.91％화77.01％.통과사선괄의적침염배양기우화료농간균개도적연초협편순시표체진행아세포정위방법,분석료linker서렬대아세포정위결과적영향.발현이YEB+100mmol/L AS화AA+100 mmol/L AS위침염배양기시형광강도대,병차표체형광적세포다；구건융합표체재체시첨가5개안기산편마서렬적linker제고료융합단백아세포정위결과적가고성.연초중개체아기아세포정위표명,NtMed8、NtMed 18、NtMed6화NtMed21정위재세포핵화세포질내,단주요재세포핵리.위진일보증실NtMed8속우연초중개체아기,동시연구NtMed8여기타아기적상호작용,구건료35S구동적함유EYFPN-단1-173안기산화C-단151-238안기산편마서렬표첨적융합표체재체(pNYE화pCYE).파NtMed8、NtMed18、NtMed6화NtMed21적전장ORF아극륭도상응적재체상,공전화연초(Nicotiana benthamiana)협편,결과표명,NtMed8여NtMed 18존재호작,동시환관찰도NtMed8여NtMed6적호작이급NtMed 18여NtMed6적호작.BiFC용우검측단백지간적호작시일충쾌첩유효적방법,능구응용우중개체아기지간결구련계적연구.
