中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2005年
5期
266-269,273
,共5页
闫玉涛%李小红%刘述先%宋光承%徐裕信
閆玉濤%李小紅%劉述先%宋光承%徐裕信
염옥도%리소홍%류술선%송광승%서유신
日本血吸虫%三磷酸甘油醛脱氢酶%核酸疫苗
日本血吸蟲%三燐痠甘油醛脫氫酶%覈痠疫苗
일본혈흡충%삼린산감유철탈경매%핵산역묘
目的研究日本血吸虫大陆株三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠诱生的免疫应答特征和保护性.方法将用免疫筛库得到的日本血吸虫大陆株GAPDH编码基因以PCR扩增,扩增产物T-A克隆至载体pT-Adv而后与真核表达载体pcDNA3连接,构建成核酸疫苗(pcDNA3-SjGAPDH).将纯化的pcDNA3-SjGAPDH经后腿胫前肌免疫C57BL/6小鼠.免疫荧光染色法研究pcDNA3-SjGAPDH在注射的局部肌肉表达特性;用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)、蛋白质印迹法(Western blotting)、ELISA等方法分析pcDNA3-SjGAPDH所诱导的特异性免疫应答特征.结果pcDNA3-SjGAPDH免疫后24和48 h即可在荧光显微镜下看到C57BL/6小鼠小腿胫前肌的局部肌肉的冰冻切片发出淡绿色荧光,表明有GAPDH蛋白的表达.pcDNA3-SjGAPDH免疫小鼠主要诱生IgG2a、IgG2b和IgG3亚类;免疫小鼠脾淋巴细胞体外经特异性抗原刺激主要诱生γ-干扰素(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)细胞因子,未检出IL-4.另外,免疫鼠血清能够识别日本血吸虫SWAP中的天然GAPDH成分.结论pcDNA3-SjGAPDH核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠主要诱导Th1类型细胞免疫应答.
目的研究日本血吸蟲大陸株三燐痠甘油醛脫氫酶(GAPDH)基因覈痠疫苗免疫C57BL/6小鼠誘生的免疫應答特徵和保護性.方法將用免疫篩庫得到的日本血吸蟲大陸株GAPDH編碼基因以PCR擴增,擴增產物T-A剋隆至載體pT-Adv而後與真覈錶達載體pcDNA3連接,構建成覈痠疫苗(pcDNA3-SjGAPDH).將純化的pcDNA3-SjGAPDH經後腿脛前肌免疫C57BL/6小鼠.免疫熒光染色法研究pcDNA3-SjGAPDH在註射的跼部肌肉錶達特性;用十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)、蛋白質印跡法(Western blotting)、ELISA等方法分析pcDNA3-SjGAPDH所誘導的特異性免疫應答特徵.結果pcDNA3-SjGAPDH免疫後24和48 h即可在熒光顯微鏡下看到C57BL/6小鼠小腿脛前肌的跼部肌肉的冰凍切片髮齣淡綠色熒光,錶明有GAPDH蛋白的錶達.pcDNA3-SjGAPDH免疫小鼠主要誘生IgG2a、IgG2b和IgG3亞類;免疫小鼠脾淋巴細胞體外經特異性抗原刺激主要誘生γ-榦擾素(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)細胞因子,未檢齣IL-4.另外,免疫鼠血清能夠識彆日本血吸蟲SWAP中的天然GAPDH成分.結論pcDNA3-SjGAPDH覈痠疫苗免疫C57BL/6小鼠主要誘導Th1類型細胞免疫應答.
목적연구일본혈흡충대륙주삼린산감유철탈경매(GAPDH)기인핵산역묘면역C57BL/6소서유생적면역응답특정화보호성.방법장용면역사고득도적일본혈흡충대륙주GAPDH편마기인이PCR확증,확증산물T-A극륭지재체pT-Adv이후여진핵표체재체pcDNA3련접,구건성핵산역묘(pcDNA3-SjGAPDH).장순화적pcDNA3-SjGAPDH경후퇴경전기면역C57BL/6소서.면역형광염색법연구pcDNA3-SjGAPDH재주사적국부기육표체특성;용십이완기류산납-취병희선알(SDS-PAGE)、단백질인적법(Western blotting)、ELISA등방법분석pcDNA3-SjGAPDH소유도적특이성면역응답특정.결과pcDNA3-SjGAPDH면역후24화48 h즉가재형광현미경하간도C57BL/6소서소퇴경전기적국부기육적빙동절편발출담록색형광,표명유GAPDH단백적표체.pcDNA3-SjGAPDH면역소서주요유생IgG2a、IgG2b화IgG3아류;면역소서비림파세포체외경특이성항원자격주요유생γ-간우소(IFN-γ)화백개소-2(IL-2)세포인자,미검출IL-4.령외,면역서혈청능구식별일본혈흡충SWAP중적천연GAPDH성분.결론pcDNA3-SjGAPDH핵산역묘면역C57BL/6소서주요유도Th1류형세포면역응답.
