CAJ | 학술논문

目的探讨检测标本中血红蛋白(Hb)浓度对PCR扩增管中Taq酶活性的影响及消除影响的方法;探讨胰酶消化痰液的应用价值;比较淋巴细胞分离液、红细胞裂解液、十二烷基硫酸钠(SDS)溶血液处理全血标本对检测结果敏感性的影响;观察SDS在结核分枝杆菌DNA(TB DNA)提取液中存在的价值及对Taq酶的影响.方法将经梯度稀释的Hb标准品与结核分枝杆菌(TB)定值质控品混匀制备成待检标本进行PCR检测;将定值Hb标准品与TB质控品混匀制备成待检标本,观察提取时100℃煮沸时间对Hb抑制Taq酶能力的影响;将结核患者的痰液分成两管,分别用4 g/dl NaOH消化、1 g/dl胰酶消化、1 g/dl胰酶消化+4 g/dl NaOH处理,比较PCR检测结果的敏感性;将结核患者的外周抗凝血分别用淋巴细胞分离液、红细胞裂解液、SDS溶血剂处理,比较PCR检测结果的敏感性;用10 g/LSDS、1%(v/v)Triton、1 g/LSDS的1%(v/v)Triton、0.5 g/L SDS的1%(v/v)Triton提取液对相同的TB质控品进行TB DNA提取,观察PCR检测结果敏感性;56份痰液、34份全血按痰液、全血标本的方法处理,进行PCR扩增,比较检测结果的阳性率.结果当Hb≥10-5g/L时,Hb对Taq酶的抑制作用随其浓度的增加而增强;提取时100℃煮沸40 min与煮沸10 min的对照管结果完全一致;痰液标本处理方法的敏感性顺序为:胰酶消化+NaOH处理＞胰酶消化＞NaOH消化;全血标本处理方法的敏感性顺序为:红细胞裂解液法=淋巴细胞分离法＞SDS溶血法;提取方法PCR检测结果敏感性顺序为:0.5 g/L SDS的1%(v/v)Triton＞1%(v/v)Triton＞1 g/L SDS的1%(v/v)Triton＞10 g/L SDS,SDS对Taq酶的抑制作用随其浓度的增加而增强.56份痰标本按上述方法处理的阳性率分别为57.1%(32/56),82.1%(46/56),91.0%(51/56),通过配对资料卡方检验,胰酶消化和胰酶消化+NaOH处理与NaOH消化法之间具有显著性差异(P＜0.005),胰酶消化和胰酶消化+NaOH处理之间差异无显著性(0.1＜P＜0.25);34份全血标本按上述方法处理的阳性率分别为79.4%(27/34),79.4%(27/34),47.0%(16/34),通过配对资料卡方检验,红细胞裂解液法和淋巴细胞分离法与SDS溶血法之间具有显著性差异(0.005＜P＜0.01).结论检测TB DNA标本的预处理有必要规范化. 目的探討檢測標本中血紅蛋白(Hb)濃度對PCR擴增管中Taq酶活性的影響及消除影響的方法;探討胰酶消化痰液的應用價值;比較淋巴細胞分離液、紅細胞裂解液、十二烷基硫痠鈉(SDS)溶血液處理全血標本對檢測結果敏感性的影響;觀察SDS在結覈分枝桿菌DNA(TB DNA)提取液中存在的價值及對Taq酶的影響.方法將經梯度稀釋的Hb標準品與結覈分枝桿菌(TB)定值質控品混勻製備成待檢標本進行PCR檢測;將定值Hb標準品與TB質控品混勻製備成待檢標本,觀察提取時100℃煮沸時間對Hb抑製Taq酶能力的影響;將結覈患者的痰液分成兩管,分彆用4 g/dl NaOH消化、1 g/dl胰酶消化、1 g/dl胰酶消化+4 g/dl NaOH處理,比較PCR檢測結果的敏感性;將結覈患者的外週抗凝血分彆用淋巴細胞分離液、紅細胞裂解液、SDS溶血劑處理,比較PCR檢測結果的敏感性;用10 g/LSDS、1%(v/v)Triton、1 g/LSDS的1%(v/v)Triton、0.5 g/L SDS的1%(v/v)Triton提取液對相同的TB質控品進行TB DNA提取,觀察PCR檢測結果敏感性;56份痰液、34份全血按痰液、全血標本的方法處理,進行PCR擴增,比較檢測結果的暘性率.結果噹Hb≥10-5g/L時,Hb對Taq酶的抑製作用隨其濃度的增加而增彊;提取時100℃煮沸40 min與煮沸10 min的對照管結果完全一緻;痰液標本處理方法的敏感性順序為:胰酶消化+NaOH處理＞胰酶消化＞NaOH消化;全血標本處理方法的敏感性順序為:紅細胞裂解液法=淋巴細胞分離法＞SDS溶血法;提取方法PCR檢測結果敏感性順序為:0.5 g/L SDS的1%(v/v)Triton＞1%(v/v)Triton＞1 g/L SDS的1%(v/v)Triton＞10 g/L SDS,SDS對Taq酶的抑製作用隨其濃度的增加而增彊.56份痰標本按上述方法處理的暘性率分彆為57.1%(32/56),82.1%(46/56),91.0%(51/56),通過配對資料卡方檢驗,胰酶消化和胰酶消化+NaOH處理與NaOH消化法之間具有顯著性差異(P＜0.005),胰酶消化和胰酶消化+NaOH處理之間差異無顯著性(0.1＜P＜0.25);34份全血標本按上述方法處理的暘性率分彆為79.4%(27/34),79.4%(27/34),47.0%(16/34),通過配對資料卡方檢驗,紅細胞裂解液法和淋巴細胞分離法與SDS溶血法之間具有顯著性差異(0.005＜P＜0.01).結論檢測TB DNA標本的預處理有必要規範化.
목적탐토검측표본중혈홍단백(Hb)농도대PCR확증관중Taq매활성적영향급소제영향적방법;탐토이매소화담액적응용개치;비교림파세포분리액、홍세포렬해액、십이완기류산납(SDS)용혈액처리전혈표본대검측결과민감성적영향;관찰SDS재결핵분지간균DNA(TB DNA)제취액중존재적개치급대Taq매적영향.방법장경제도희석적Hb표준품여결핵분지간균(TB)정치질공품혼균제비성대검표본진행PCR검측;장정치Hb표준품여TB질공품혼균제비성대검표본,관찰제취시100℃자비시간대Hb억제Taq매능력적영향;장결핵환자적담액분성량관,분별용4 g/dl NaOH소화、1 g/dl이매소화、1 g/dl이매소화+4 g/dl NaOH처리,비교PCR검측결과적민감성;장결핵환자적외주항응혈분별용림파세포분리액、홍세포렬해액、SDS용혈제처리,비교PCR검측결과적민감성;용10 g/LSDS、1%(v/v)Triton、1 g/LSDS적1%(v/v)Triton、0.5 g/L SDS적1%(v/v)Triton제취액대상동적TB질공품진행TB DNA제취,관찰PCR검측결과민감성;56빈담액、34빈전혈안담액、전혈표본적방법처리,진행PCR확증,비교검측결과적양성솔.결과당Hb≥10-5g/L시,Hb대Taq매적억제작용수기농도적증가이증강;제취시100℃자비40 min여자비10 min적대조관결과완전일치;담액표본처리방법적민감성순서위:이매소화+NaOH처리＞이매소화＞NaOH소화;전혈표본처리방법적민감성순서위:홍세포렬해액법=림파세포분리법＞SDS용혈법;제취방법PCR검측결과민감성순서위:0.5 g/L SDS적1%(v/v)Triton＞1%(v/v)Triton＞1 g/L SDS적1%(v/v)Triton＞10 g/L SDS,SDS대Taq매적억제작용수기농도적증가이증강.56빈담표본안상술방법처리적양성솔분별위57.1%(32/56),82.1%(46/56),91.0%(51/56),통과배대자료잡방검험,이매소화화이매소화+NaOH처리여NaOH소화법지간구유현저성차이(P＜0.005),이매소화화이매소화+NaOH처리지간차이무현저성(0.1＜P＜0.25);34빈전혈표본안상술방법처리적양성솔분별위79.4%(27/34),79.4%(27/34),47.0%(16/34),통과배대자료잡방검험,홍세포렬해액법화림파세포분리법여SDS용혈법지간구유현저성차이(0.005＜P＜0.01).결론검측TB DNA표본적예처리유필요규범화.