CAJ | 학술논문

经DEAE 52, Q-Sepharose和Sephacryl S-200柱的厌氧层析, 从缺失nifZ基因的棕色固氮菌突变株(DJ194)中纯化得到固氮酶钼铁蛋白(ΔnifZ Av1). 厌氧天然电泳后的Western blotting和SDS-变性凝胶电泳显示, ΔnifZ Av1的电泳迁移率、分子量和亚基组成等与野生种钼铁蛋白(OP Av1)相似; 而且ΔnifZ Av1的Mo含量、EPR信号(g ≈ 4.3, 3.65和2.01)及660 nm附近的圆二色摩尔消光系数(Δε)也都与OP Av1较相似, 表明ΔnifZ Av1除具有α2β2四聚体结构组成外, 还含有与OP Av1数量相当的、具有3/2自旋态的还原FeMoco. 然而, ΔnifZ Av1的Fe含量和对底物 (C2H2, H+和N2)的还原活性都较低, 分别约为OP Av1的74%和46%～50%, 而反映P-cluster状况的450 nm附近的Δε也明显低于OP Av1, 说明ΔnifZ Av1与OP Av1的差别在于P-cluster, 而不在于FeMoco, 而且是在于ΔnifZ Av1中P-cluster数目的减少(约50%), 而其组成或氧还状态并未改变. 据此推测ΔnifZ Av1(DJ194)的结构为: 一个αβ亚基对含有一个FeMoco和一个P-cluster, 而另一个αβ亚基对只含FeMoco, 无P-cluster. 由于nifZ基因的缺失只造成了钼铁蛋白中2个P-cluster中的一个不能组装, 因此推测P-cluster的组装可能不是受单一基因产物的影响并由此提出了NifZ的可能作用机理.
경DEAE 52, Q-Sepharose화Sephacryl S-200주적염양층석, 종결실nifZ기인적종색고담균돌변주(DJ194)중순화득도고담매목철단백(ΔnifZ Av1). 염양천연전영후적Western blotting화SDS-변성응효전영현시, ΔnifZ Av1적전영천이솔、분자량화아기조성등여야생충목철단백(OP Av1)상사; 이차ΔnifZ Av1적Mo함량、EPR신호(g ≈ 4.3, 3.65화2.01)급660 nm부근적원이색마이소광계수(Δε)야도여OP Av1교상사, 표명ΔnifZ Av1제구유α2β2사취체결구조성외, 환함유여OP Av1수량상당적、구유3/2자선태적환원FeMoco. 연이, ΔnifZ Av1적Fe함량화대저물 (C2H2, H+화N2)적환원활성도교저, 분별약위OP Av1적74%화46%～50%, 이반영P-cluster상황적450 nm부근적Δε야명현저우OP Av1, 설명ΔnifZ Av1여OP Av1적차별재우P-cluster, 이불재우FeMoco, 이차시재우ΔnifZ Av1중P-cluster수목적감소(약50%), 이기조성혹양환상태병미개변. 거차추측ΔnifZ Av1(DJ194)적결구위: 일개αβ아기대함유일개FeMoco화일개P-cluster, 이령일개αβ아기대지함FeMoco, 무P-cluster. 유우nifZ기인적결실지조성료목철단백중2개P-cluster중적일개불능조장, 인차추측P-cluster적조장가능불시수단일기인산물적영향병유차제출료NifZ적가능작용궤리.