第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2007年
17期
1650-1653
,共4页
谭虎%杨天德%粟永萍%艾国平%黄岚%陶军%刘晓宏%楼淑芬
譚虎%楊天德%粟永萍%艾國平%黃嵐%陶軍%劉曉宏%樓淑芬
담호%양천덕%속영평%애국평%황람%도군%류효굉%루숙분
胰高血糖素样肽-2%基因克隆%PCR重叠延伸技术%肠上皮%细胞增殖
胰高血糖素樣肽-2%基因剋隆%PCR重疊延伸技術%腸上皮%細胞增殖
이고혈당소양태-2%기인극륭%PCR중첩연신기술%장상피%세포증식
目的 对胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptid-2, GLP-2)进行基因修饰,观察其促细胞增殖活性.方法 通过RT-PCR方法获得含GLP2编码序列的高血糖素原cDNA片段;通过PCR重叠延伸技术得到GLP2信号肽及成熟肽的嵌合分子,并将编码GLP2成熟肽N-末端第二位丙氨酸的序列(GCT)突变为编码甘氨酸的序列(GGT);将其插入真核表达质粒pVITRO3,转染至肠上皮细胞(Caco-2),观察其对细胞增殖活性的影响.结果 克隆的修饰GLP2基因与国外报道的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列完全一致,并成功拼接GLP2的信号肽及成熟肽;且加入pVITRO3-GLP2-Caco-2培养上清的细胞生长明显快于对照组.结论 PCR重叠延伸技术适用于分泌性载体构建.构建的修饰GLP2表达系统所表达的蛋白具有促进肠上皮细胞增殖的作用.
目的 對胰高血糖素樣肽-2(glucagon-like peptid-2, GLP-2)進行基因脩飾,觀察其促細胞增殖活性.方法 通過RT-PCR方法穫得含GLP2編碼序列的高血糖素原cDNA片段;通過PCR重疊延伸技術得到GLP2信號肽及成熟肽的嵌閤分子,併將編碼GLP2成熟肽N-末耑第二位丙氨痠的序列(GCT)突變為編碼甘氨痠的序列(GGT);將其插入真覈錶達質粒pVITRO3,轉染至腸上皮細胞(Caco-2),觀察其對細胞增殖活性的影響.結果 剋隆的脩飾GLP2基因與國外報道的覈苷痠序列及其編碼的氨基痠序列完全一緻,併成功拼接GLP2的信號肽及成熟肽;且加入pVITRO3-GLP2-Caco-2培養上清的細胞生長明顯快于對照組.結論 PCR重疊延伸技術適用于分泌性載體構建.構建的脩飾GLP2錶達繫統所錶達的蛋白具有促進腸上皮細胞增殖的作用.
목적 대이고혈당소양태-2(glucagon-like peptid-2, GLP-2)진행기인수식,관찰기촉세포증식활성.방법 통과RT-PCR방법획득함GLP2편마서렬적고혈당소원cDNA편단;통과PCR중첩연신기술득도GLP2신호태급성숙태적감합분자,병장편마GLP2성숙태N-말단제이위병안산적서렬(GCT)돌변위편마감안산적서렬(GGT);장기삽입진핵표체질립pVITRO3,전염지장상피세포(Caco-2),관찰기대세포증식활성적영향.결과 극륭적수식GLP2기인여국외보도적핵감산서렬급기편마적안기산서렬완전일치,병성공병접GLP2적신호태급성숙태;차가입pVITRO3-GLP2-Caco-2배양상청적세포생장명현쾌우대조조.결론 PCR중첩연신기술괄용우분비성재체구건.구건적수식GLP2표체계통소표체적단백구유촉진장상피세포증식적작용.
