CAJ | 학술논문

背景:成骨生长肽在体内外细胞培养中具有明显的促成骨活性,这种促成骨作用的分子机制还不清楚,现已通过人工方法成功制备了合成成骨生长肽.目的:探讨合成成骨生长肽对体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的作用.设计、时间及地点:基因和蛋白水平的细胞学体外观察,于2006-07/2007-12在福建省医学科学研究所基因工程实验室及复旦大学附属中山医院中心实验室完成.材料:骨髓标本来源于福建省立医院骨一科收治的男性髂骨植骨患者,合成成骨生长肽由中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所崔大敖教授惠赠,ERK1/2抑制剂UO126为美国CST公司产品.方法:密度梯度离心法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,单纯矿化液组加入由10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50 mg/L L-抗坏血酸组成的矿化液;10-7,10-9,1011 mol/L合成成骨生长肽组分别加入对应浓度的合成成骨生长肽,再加入矿化液;常规培养组加入含体积分数为0.1胎生血清的低糖DMEM.主要观察指标:倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR法和免疫组织化学染色检测成骨标志物的表达,Westem-blot法分析合成成骨生长肽对ERK1/2信号通路的影响,观察UO126对合成成骨生长肽作用的干预.结果:加入合成成骨生长肽后,骨髓间充质干细胞体积增大,突起增多,呈多角形,胞浆含有较多颗粒状物质,出现致密细胞结节.合成成骨生长肽在mRNA和蛋白水平均能促进成骨标志物碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原,骨钙素的表达,定量分析结果显示10-9mol/L合成成骨生长肽促成骨作用最强.加入合成成骨生长肽后能够引起ERK1/2信号通路的持续性激活,经UO126预处理后几乎完全阻断了合成成骨生长肽对骨髓间充质干细胞的促成骨作用.结论:合成成骨生长肽可明显促进人骨髓间充质干细胞向成骨方向的转化,在10-9 mol/L浓度下促成骨能力最强,其促成骨作用可能是通过激活MAPK家族ERK1/2途径实现的. 揹景:成骨生長肽在體內外細胞培養中具有明顯的促成骨活性,這種促成骨作用的分子機製還不清楚,現已通過人工方法成功製備瞭閤成成骨生長肽.目的:探討閤成成骨生長肽對體外培養的人骨髓間充質榦細胞嚮成骨方嚮分化的作用.設計、時間及地點:基因和蛋白水平的細胞學體外觀察,于2006-07/2007-12在福建省醫學科學研究所基因工程實驗室及複旦大學附屬中山醫院中心實驗室完成.材料:骨髓標本來源于福建省立醫院骨一科收治的男性髂骨植骨患者,閤成成骨生長肽由中國科學院上海生命科學研究院生物化學與細胞生物學研究所崔大敖教授惠贈,ERK1/2抑製劑UO126為美國CST公司產品.方法:密度梯度離心法體外分離培養人骨髓間充質榦細胞,單純礦化液組加入由10 mmol/Lβ-甘油燐痠鈉、50 mg/L L-抗壞血痠組成的礦化液;10-7,10-9,1011 mol/L閤成成骨生長肽組分彆加入對應濃度的閤成成骨生長肽,再加入礦化液;常規培養組加入含體積分數為0.1胎生血清的低糖DMEM.主要觀察指標:倒置顯微鏡觀察細胞形態變化,RT-PCR法和免疫組織化學染色檢測成骨標誌物的錶達,Westem-blot法分析閤成成骨生長肽對ERK1/2信號通路的影響,觀察UO126對閤成成骨生長肽作用的榦預.結果:加入閤成成骨生長肽後,骨髓間充質榦細胞體積增大,突起增多,呈多角形,胞漿含有較多顆粒狀物質,齣現緻密細胞結節.閤成成骨生長肽在mRNA和蛋白水平均能促進成骨標誌物堿性燐痠酶、Ⅰ型膠原,骨鈣素的錶達,定量分析結果顯示10-9mol/L閤成成骨生長肽促成骨作用最彊.加入閤成成骨生長肽後能夠引起ERK1/2信號通路的持續性激活,經UO126預處理後幾乎完全阻斷瞭閤成成骨生長肽對骨髓間充質榦細胞的促成骨作用.結論:閤成成骨生長肽可明顯促進人骨髓間充質榦細胞嚮成骨方嚮的轉化,在10-9 mol/L濃度下促成骨能力最彊,其促成骨作用可能是通過激活MAPK傢族ERK1/2途徑實現的.
배경:성골생장태재체내외세포배양중구유명현적촉성골활성,저충촉성골작용적분자궤제환불청초,현이통과인공방법성공제비료합성성골생장태.목적:탐토합성성골생장태대체외배양적인골수간충질간세포향성골방향분화적작용.설계、시간급지점:기인화단백수평적세포학체외관찰,우2006-07/2007-12재복건성의학과학연구소기인공정실험실급복단대학부속중산의원중심실험실완성.재료:골수표본래원우복건성립의원골일과수치적남성가골식골환자,합성성골생장태유중국과학원상해생명과학연구원생물화학여세포생물학연구소최대오교수혜증,ERK1/2억제제UO126위미국CST공사산품.방법:밀도제도리심법체외분리배양인골수간충질간세포,단순광화액조가입유10 mmol/Lβ-감유린산납、50 mg/L L-항배혈산조성적광화액;10-7,10-9,1011 mol/L합성성골생장태조분별가입대응농도적합성성골생장태,재가입광화액;상규배양조가입함체적분수위0.1태생혈청적저당DMEM.주요관찰지표:도치현미경관찰세포형태변화,RT-PCR법화면역조직화학염색검측성골표지물적표체,Westem-blot법분석합성성골생장태대ERK1/2신호통로적영향,관찰UO126대합성성골생장태작용적간예.결과:가입합성성골생장태후,골수간충질간세포체적증대,돌기증다,정다각형,포장함유교다과립상물질,출현치밀세포결절.합성성골생장태재mRNA화단백수평균능촉진성골표지물감성린산매、Ⅰ형효원,골개소적표체,정량분석결과현시10-9mol/L합성성골생장태촉성골작용최강.가입합성성골생장태후능구인기ERK1/2신호통로적지속성격활,경UO126예처리후궤호완전조단료합성성골생장태대골수간충질간세포적촉성골작용.결론:합성성골생장태가명현촉진인골수간충질간세포향성골방향적전화,재10-9 mol/L농도하촉성골능력최강,기촉성골작용가능시통과격활MAPK가족ERK1/2도경실현적.