生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2009年
9期
111-116
,共6页
房国梁%刘志国%宗义强%张大川%曾丽娟%付云洁%屈伸
房國樑%劉誌國%宗義彊%張大川%曾麗娟%付雲潔%屈伸
방국량%류지국%종의강%장대천%증려연%부운길%굴신
蛋白G IgG Fc段结合域%多克隆抗体%原核表达
蛋白G IgG Fc段結閤域%多剋隆抗體%原覈錶達
단백G IgG Fc단결합역%다극륭항체%원핵표체
旨在研究蛋白G IgG Fc段结合域(PGFB)的克隆、表达及其抗体结合功能,用于抗体的纯化.根据PGFB的氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成了4个寡核苷酸片段.通过重叠延伸PCR方法合成了PGFB DNA片段,测序鉴定后克隆至原核表达系统pET-28a-c(+)上,转化大肠杆菌,获得表达菌株;IPTG诱导表达PGFB,经Ni+-NTA琼脂糖凝胶层析纯化后偶联到琼脂糖凝胶6B上,用其纯化多克隆抗体.结果显示,PGFB在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,纯化后纯度达到90%以上,相对分子量为12.25 kD,与预期值相符.此外,偶联产物纯化多克隆抗体达到了良好的效果,每毫升基质可结合20 mg抗体.本研究克隆构建并高效表达了具有较好抗体亲和能力的PGFB,为多克隆抗体的快速纯化提供了方便.
旨在研究蛋白G IgG Fc段結閤域(PGFB)的剋隆、錶達及其抗體結閤功能,用于抗體的純化.根據PGFB的氨基痠序列,選擇大腸桿菌偏愛的密碼子,設計併閤成瞭4箇寡覈苷痠片段.通過重疊延伸PCR方法閤成瞭PGFB DNA片段,測序鑒定後剋隆至原覈錶達繫統pET-28a-c(+)上,轉化大腸桿菌,穫得錶達菌株;IPTG誘導錶達PGFB,經Ni+-NTA瓊脂糖凝膠層析純化後偶聯到瓊脂糖凝膠6B上,用其純化多剋隆抗體.結果顯示,PGFB在大腸桿菌BL21(DE3)中穫得高效錶達,純化後純度達到90%以上,相對分子量為12.25 kD,與預期值相符.此外,偶聯產物純化多剋隆抗體達到瞭良好的效果,每毫升基質可結閤20 mg抗體.本研究剋隆構建併高效錶達瞭具有較好抗體親和能力的PGFB,為多剋隆抗體的快速純化提供瞭方便.
지재연구단백G IgG Fc단결합역(PGFB)적극륭、표체급기항체결합공능,용우항체적순화.근거PGFB적안기산서렬,선택대장간균편애적밀마자,설계병합성료4개과핵감산편단.통과중첩연신PCR방법합성료PGFB DNA편단,측서감정후극륭지원핵표체계통pET-28a-c(+)상,전화대장간균,획득표체균주;IPTG유도표체PGFB,경Ni+-NTA경지당응효층석순화후우련도경지당응효6B상,용기순화다극륭항체.결과현시,PGFB재대장간균BL21(DE3)중획득고효표체,순화후순도체도90%이상,상대분자량위12.25 kD,여예기치상부.차외,우련산물순화다극륭항체체도료량호적효과,매호승기질가결합20 mg항체.본연구극륭구건병고효표체료구유교호항체친화능력적PGFB,위다극륭항체적쾌속순화제공료방편.
