中国组织化学与细胞化学杂志
中國組織化學與細胞化學雜誌
중국조직화학여세포화학잡지
CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISY AND CYTOCHEMISY
2009年
5期
508-514
,共7页
章宏峰%张亦农%汪薇曦%贺军%李和
章宏峰%張亦農%汪薇晞%賀軍%李和
장굉봉%장역농%왕미희%하군%리화
内泛素-蛋白酶体系统%绿色荧光蛋白%红色荧光蛋白%降解信号%蛋白酶体抑制剂
內汎素-蛋白酶體繫統%綠色熒光蛋白%紅色熒光蛋白%降解信號%蛋白酶體抑製劑
내범소-단백매체계통%록색형광단백%홍색형광단백%강해신호%단백매체억제제
目的 建立一种动态检测活细胞内泛素-蛋白酶体系统活性的方法.方法 将表达绿色荧光蛋白(GFP)或红色荧光蛋白(DsRed2)的质粒分别改建为表达带有内泛素-蛋白酶体系统降解信号CL1的GFP或DsRed2的pGFPu或pDsRed2u质粒,然后转染HEK293细胞,通过G418筛选得到稳定表达GFPu或DsRed2u的细胞系.在蛋白酶体抑制剂N-Acetyl-Leu-Leu-Norleu-al(ALLN)处理GFPu或DsRed2u细胞后,应用免疫印记技术检测细胞内GFP或DsRed2含量的变化,应用荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜技术观察GFP或DsRed2荧光强度的变化.结果 ALLN处理能使GFPu和DsRed2u细胞内GFP和DsRed,含量明显增加,荧光强度显著增强,并呈现明显的剂量/时间-效应关系.结论 本文成功地建立了检测内泛素-蛋白酶体系统活性的方法,该方法能有效地对活细胞的内泛素-蛋白酶体系统活性进行实时动态检测.
目的 建立一種動態檢測活細胞內汎素-蛋白酶體繫統活性的方法.方法 將錶達綠色熒光蛋白(GFP)或紅色熒光蛋白(DsRed2)的質粒分彆改建為錶達帶有內汎素-蛋白酶體繫統降解信號CL1的GFP或DsRed2的pGFPu或pDsRed2u質粒,然後轉染HEK293細胞,通過G418篩選得到穩定錶達GFPu或DsRed2u的細胞繫.在蛋白酶體抑製劑N-Acetyl-Leu-Leu-Norleu-al(ALLN)處理GFPu或DsRed2u細胞後,應用免疫印記技術檢測細胞內GFP或DsRed2含量的變化,應用熒光顯微鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡技術觀察GFP或DsRed2熒光彊度的變化.結果 ALLN處理能使GFPu和DsRed2u細胞內GFP和DsRed,含量明顯增加,熒光彊度顯著增彊,併呈現明顯的劑量/時間-效應關繫.結論 本文成功地建立瞭檢測內汎素-蛋白酶體繫統活性的方法,該方法能有效地對活細胞的內汎素-蛋白酶體繫統活性進行實時動態檢測.
목적 건립일충동태검측활세포내범소-단백매체계통활성적방법.방법 장표체록색형광단백(GFP)혹홍색형광단백(DsRed2)적질립분별개건위표체대유내범소-단백매체계통강해신호CL1적GFP혹DsRed2적pGFPu혹pDsRed2u질립,연후전염HEK293세포,통과G418사선득도은정표체GFPu혹DsRed2u적세포계.재단백매체억제제N-Acetyl-Leu-Leu-Norleu-al(ALLN)처리GFPu혹DsRed2u세포후,응용면역인기기술검측세포내GFP혹DsRed2함량적변화,응용형광현미경화격광소묘공취초현미경기술관찰GFP혹DsRed2형광강도적변화.결과 ALLN처리능사GFPu화DsRed2u세포내GFP화DsRed,함량명현증가,형광강도현저증강,병정현명현적제량/시간-효응관계.결론 본문성공지건립료검측내범소-단백매체계통활성적방법,해방법능유효지대활세포적내범소-단백매체계통활성진행실시동태검측.
