医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2011年
10期
52-55
,共4页
钮利喜%陈华伟%李娇%杨斌盛
鈕利喜%陳華偉%李嬌%楊斌盛
뉴리희%진화위%리교%양빈성
hTERT核心启动子%肿瘤%靶向性%基因治疗
hTERT覈心啟動子%腫瘤%靶嚮性%基因治療
hTERT핵심계동자%종류%파향성%기인치료
目的 构建并鉴定人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)基因核心启动子调控的EGFP 基因表达载体.方法 从体外培养的HepG2细胞中提取全基因组DNA,以此为模板,克隆得到hTERT基因启动子核心区基因片段(hTERTp).设计引物以质粒pEGFP-N1为模板利用PCR扩增得到EGFP基因片段,将两者通过搭桥PCR扩增得到hTERTp -EGFP片段,经Sac Ⅰ、Xba Ⅰ双酶切定向插入到pGL3-Enhancer载体中,得到重组表达载体pGL3-hTERTp-EGFP.将该表达载体瞬时转染HELF细胞和HeLa细胞后观察EGFP蛋白表达情况.结果 重组质粒经测序后确认插入序列正确无误,瞬时转染48h后在HeLa细胞中可以看到EGFP蛋白的大量表达,而在HELF细胞中未见表达.结论 成功构建了可以通过hTERT核心启动子调控治疗基因在肿瘤细胞中特异表达的重组表达载体pGL3-hTERTp-EGFP.
目的 構建併鑒定人耑粒酶反轉錄酶(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)基因覈心啟動子調控的EGFP 基因錶達載體.方法 從體外培養的HepG2細胞中提取全基因組DNA,以此為模闆,剋隆得到hTERT基因啟動子覈心區基因片段(hTERTp).設計引物以質粒pEGFP-N1為模闆利用PCR擴增得到EGFP基因片段,將兩者通過搭橋PCR擴增得到hTERTp -EGFP片段,經Sac Ⅰ、Xba Ⅰ雙酶切定嚮插入到pGL3-Enhancer載體中,得到重組錶達載體pGL3-hTERTp-EGFP.將該錶達載體瞬時轉染HELF細胞和HeLa細胞後觀察EGFP蛋白錶達情況.結果 重組質粒經測序後確認插入序列正確無誤,瞬時轉染48h後在HeLa細胞中可以看到EGFP蛋白的大量錶達,而在HELF細胞中未見錶達.結論 成功構建瞭可以通過hTERT覈心啟動子調控治療基因在腫瘤細胞中特異錶達的重組錶達載體pGL3-hTERTp-EGFP.
목적 구건병감정인단립매반전록매(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)기인핵심계동자조공적EGFP 기인표체재체.방법 종체외배양적HepG2세포중제취전기인조DNA,이차위모판,극륭득도hTERT기인계동자핵심구기인편단(hTERTp).설계인물이질립pEGFP-N1위모판이용PCR확증득도EGFP기인편단,장량자통과탑교PCR확증득도hTERTp -EGFP편단,경Sac Ⅰ、Xba Ⅰ쌍매절정향삽입도pGL3-Enhancer재체중,득도중조표체재체pGL3-hTERTp-EGFP.장해표체재체순시전염HELF세포화HeLa세포후관찰EGFP단백표체정황.결과 중조질립경측서후학인삽입서렬정학무오,순시전염48h후재HeLa세포중가이간도EGFP단백적대량표체,이재HELF세포중미견표체.결론 성공구건료가이통과hTERT핵심계동자조공치료기인재종류세포중특이표체적중조표체재체pGL3-hTERTp-EGFP.
