CAJ | 학술논문

目的探讨带有导引序列的核糖核酸酶P亚单位M1 RNA(M1-GS RNA)转染白血病细胞株K562细胞后对bcr-abl融合基因mRNA及其表达产物的作用效应.方法含有针对bcr-ablmRNA的M1-GS RNA表达质粒pAVGS4,以X-treme Q2介导转染K562细胞,设置空载体组作为对照,分别在转染后24,48,72和96 h收集细胞,以Trizol试剂抽提总RNA,通过RT-PCR检测转染后不同时间bcr-abl mRNA的变化;在转染后48和96 h,抽提总蛋白质,通过Western blot检测癌基因的表达产物P210在不同时间的变化.利用半固体琼脂培养方法观察pAVGS4对K562细胞集落形成的影响.结果pAVGS4转染K562细胞后24,48,72和96 h RT-PCR结果显示:在转染后24 h,随时间的推移,实验组细胞内bcr-abl mRNA含量下降近1个对数级,72和96 h实验组细胞内bcr-abl mRNA的含量接近,而对照组无明显改变.Western blot结果显示:实验组在48 h的灰度值是同期对照组的10.4%,96 h时为6.7%.K562细胞集落形成分析显示96 h后集落抑制率达81.3%.结论M1-GSRNA可以有效、特异地破坏bcr-abl mRNA,显著下调P210的表达,抑制K562集落形成.
목적탐토대유도인서렬적핵당핵산매P아단위M1 RNA(M1-GS RNA)전염백혈병세포주K562세포후대bcr-abl융합기인mRNA급기표체산물적작용효응.방법함유침대bcr-ablmRNA적M1-GS RNA표체질립pAVGS4,이X-treme Q2개도전염K562세포,설치공재체조작위대조,분별재전염후24,48,72화96 h수집세포,이Trizol시제추제총RNA,통과RT-PCR검측전염후불동시간bcr-abl mRNA적변화;재전염후48화96 h,추제총단백질,통과Western blot검측암기인적표체산물P210재불동시간적변화.이용반고체경지배양방법관찰pAVGS4대K562세포집락형성적영향.결과pAVGS4전염K562세포후24,48,72화96 h RT-PCR결과현시:재전염후24 h,수시간적추이,실험조세포내bcr-abl mRNA함량하강근1개대수급,72화96 h실험조세포내bcr-abl mRNA적함량접근,이대조조무명현개변.Western blot결과현시:실험조재48 h적회도치시동기대조조적10.4%,96 h시위6.7%.K562세포집락형성분석현시96 h후집락억제솔체81.3%.결론M1-GSRNA가이유효、특이지파배bcr-abl mRNA,현저하조P210적표체,억제K562집락형성.