腺病毒载体介导的ICOSIg融合基因对实验性自身免疫性心肌炎作用的研究
선병독재체개도적ICOSIg융합기인대실험성자신면역성심기염작용적연구
Effects of adenovirus-mediated gene transfer of ICOSIg fusion protein on experimental autoimmune myocarditis in Lewis rats
  • 万方数据
    中华心血管病杂志 중화심혈관병잡지
    Chinese Journal of Cardiology
    2007年 1期 28-32 ,共5页

    李为民%刘巍%张瑞宏%王政%孔一慧%李悦%杨树森%沈景霞%于江波%樊瑛%薛竞宜%耿建强

    리위민%류외%장서굉%왕정%공일혜%리열%양수삼%침경하%우강파%번영%설경의%경건강

    心肌炎%病毒融合蛋白质类%基因治疗 心肌炎%病毒融閤蛋白質類%基因治療
    심기염%병독융합단백질류%기인치료
    目的 探讨腺病毒载体介导的ICOSIg基因治疗对实验性自身免疫性心肌炎(EAM)的作用.方法 将人ICOS胞外域与免疫球蛋白IgGFc段融合,构建ICOSIg融合基因的腺病毒表达载体p-Adeno-ICOSIg.PacⅠ消化腺病毒载体后转染HEK 293细胞,生产表达ICOSIg融合蛋白的腺病毒;构建增强型绿色荧光蛋白腺病毒作为对照.皮下注射猪心肌肌球蛋白诱导Lewis大鼠EAM模型,随机分为4组,分别于免疫当天(第0天)(A组,n=15)和第14天(B组,n=15)通过股静脉注射ICOSIg重组腺病毒,观察共刺激分子融合蛋白对T细胞激活阶段和炎症阶段的作用,C组(n=10)和D组(n=10)分别在第0天和第14天注射表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组腺病毒.另设E组(n=10)未接受免疫的正常对照组.免疫第28天,超声心动图检测后处死动物.HE染色检测心肌炎症浸润程度.Western blot检测心肌ICOS、ICOSL、B7-1及B7-2蛋白表达.实时定量RT-PCR定量心肌IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA水平.结果 第28天B组大鼠心功能指标(短轴缩短率:40.6±6.2 比 26.2±4.6, 20.8±5.6, 21.7±9.6)、心肌炎症程度较对照组显著改善.Western blot显示B组ICOS、ICOSL及B7-1蛋白表达显著下调,各组间B7-2蛋白表达差异未见统计学意义.B组大鼠心肌组织IFN-γ mRNA表达降低(19.8±7.9比 66.6±4.5, 79.6±5.9, 80.9±5.1),IL-4 mRNA表达增加(42.3±8.6 比 19.7±3.8, 22.3±9.0, 28.3±2.2),IL-2表达各组间无显著差异,因此B组IFN-γ/IL-4比值显著低于A、C及D组(0.47±0.36 比2.91±0.22, 1.89±0.42, 2.32±0.83),表明Th细胞因子平衡向Th2方向偏离.结论 炎症高峰期以ICOSIg阻断共刺激分子通路能够减轻EAM心肌组织炎症,改善大鼠心脏功能.其机制可能是下调心肌组织局部ICOS、ICOSL和B7-1表达及对炎症性细胞因子的抑制作用.
    목적 탐토선병독재체개도적ICOSIg기인치료대실험성자신면역성심기염(EAM)적작용.방법 장인ICOS포외역여면역구단백IgGFc단융합,구건ICOSIg융합기인적선병독표체재체p-Adeno-ICOSIg.PacⅠ소화선병독재체후전염HEK 293세포,생산표체ICOSIg융합단백적선병독;구건증강형록색형광단백선병독작위대조.피하주사저심기기구단백유도Lewis대서EAM모형,수궤분위4조,분별우면역당천(제0천)(A조,n=15)화제14천(B조,n=15)통과고정맥주사ICOSIg중조선병독,관찰공자격분자융합단백대T세포격활계단화염증계단적작용,C조(n=10)화D조(n=10)분별재제0천화제14천주사표체증강형록색형광단백(EGFP)적중조선병독.령설E조(n=10)미접수면역적정상대조조.면역제28천,초성심동도검측후처사동물.HE염색검측심기염증침윤정도.Western blot검측심기ICOS、ICOSL、B7-1급B7-2단백표체.실시정량RT-PCR정량심기IL-2、IL-4화IFN-γ mRNA수평.결과 제28천B조대서심공능지표(단축축단솔:40.6±6.2 비 26.2±4.6, 20.8±5.6, 21.7±9.6)、심기염증정도교대조조현저개선.Western blot현시B조ICOS、ICOSL급B7-1단백표체현저하조,각조간B7-2단백표체차이미견통계학의의.B조대서심기조직IFN-γ mRNA표체강저(19.8±7.9비 66.6±4.5, 79.6±5.9, 80.9±5.1),IL-4 mRNA표체증가(42.3±8.6 비 19.7±3.8, 22.3±9.0, 28.3±2.2),IL-2표체각조간무현저차이,인차B조IFN-γ/IL-4비치현저저우A、C급D조(0.47±0.36 비2.91±0.22, 1.89±0.42, 2.32±0.83),표명Th세포인자평형향Th2방향편리.결론 염증고봉기이ICOSIg조단공자격분자통로능구감경EAM심기조직염증,개선대서심장공능.기궤제가능시하조심기조직국부ICOS、ICOSL화B7-1표체급대염증성세포인자적억제작용.
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