中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2003年
6期
751-756
,共6页
陈冬瑛%朱全胜%刘超%丘钜世
陳鼕瑛%硃全勝%劉超%丘鉅世
진동영%주전성%류초%구거세
骨形态发生蛋白类%基因%融合蛋白
骨形態髮生蛋白類%基因%融閤蛋白
골형태발생단백류%기인%융합단백
目的:利用基因工程技术生产人骨形态发生蛋白-1的高保守区多肽,为进一步产生广谱型BMP-1抗体提供有效的抗原蛋白.方法:通过分析BMP-1类各种分子的基因序列及蛋白结构,选择其中的一个片段作为目的基因.从人骨肉瘤细胞株Saos-2中提取总RNA, 用RT-PCR扩增目的基因片段并克隆到原核表达载体pMAL c2中, 构建成重组质粒BMP-1(322-588aa)-pMAL c2.将该重组质粒转化大肠杆菌DH5-α, 经过筛选鉴定获得数个阳性克隆,再进行DNA序列测定.最后用IPTG诱导宿主菌表达融合蛋白.结果:BMP-1基因片段被成功地克隆到pMALc2载体中,在IPTG的诱导下能高效表达,融合蛋白的表达量占细菌蛋白总量的(66-72)%. 结论:所获得的重组蛋白包含BMP-1的几个完整的重要结构域(2个CUB区和1个EGF区),为BMP-1类分子所共有的高度保守区.该重组蛋白作为抗原,可进一步用于产生能有效、特异地识别人类BMP-1类分子的广谱型BMP-1抗体.
目的:利用基因工程技術生產人骨形態髮生蛋白-1的高保守區多肽,為進一步產生廣譜型BMP-1抗體提供有效的抗原蛋白.方法:通過分析BMP-1類各種分子的基因序列及蛋白結構,選擇其中的一箇片段作為目的基因.從人骨肉瘤細胞株Saos-2中提取總RNA, 用RT-PCR擴增目的基因片段併剋隆到原覈錶達載體pMAL c2中, 構建成重組質粒BMP-1(322-588aa)-pMAL c2.將該重組質粒轉化大腸桿菌DH5-α, 經過篩選鑒定穫得數箇暘性剋隆,再進行DNA序列測定.最後用IPTG誘導宿主菌錶達融閤蛋白.結果:BMP-1基因片段被成功地剋隆到pMALc2載體中,在IPTG的誘導下能高效錶達,融閤蛋白的錶達量佔細菌蛋白總量的(66-72)%. 結論:所穫得的重組蛋白包含BMP-1的幾箇完整的重要結構域(2箇CUB區和1箇EGF區),為BMP-1類分子所共有的高度保守區.該重組蛋白作為抗原,可進一步用于產生能有效、特異地識彆人類BMP-1類分子的廣譜型BMP-1抗體.
목적:이용기인공정기술생산인골형태발생단백-1적고보수구다태,위진일보산생엄보형BMP-1항체제공유효적항원단백.방법:통과분석BMP-1류각충분자적기인서렬급단백결구,선택기중적일개편단작위목적기인.종인골육류세포주Saos-2중제취총RNA, 용RT-PCR확증목적기인편단병극륭도원핵표체재체pMAL c2중, 구건성중조질립BMP-1(322-588aa)-pMAL c2.장해중조질립전화대장간균DH5-α, 경과사선감정획득수개양성극륭,재진행DNA서렬측정.최후용IPTG유도숙주균표체융합단백.결과:BMP-1기인편단피성공지극륭도pMALc2재체중,재IPTG적유도하능고효표체,융합단백적표체량점세균단백총량적(66-72)%. 결론:소획득적중조단백포함BMP-1적궤개완정적중요결구역(2개CUB구화1개EGF구),위BMP-1류분자소공유적고도보수구.해중조단백작위항원,가진일보용우산생능유효、특이지식별인류BMP-1류분자적엄보형BMP-1항체.
