苏州大学学报（医学版）
囌州大學學報（醫學版）
소주대학학보（의학판）
SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE
2005年
6期
955-958
,共4页
胡春洪%罗加林%曹建平%周献峰%郑斯英%丁乙
鬍春洪%囉加林%曹建平%週獻峰%鄭斯英%丁乙
호춘홍%라가림%조건평%주헌봉%정사영%정을
基因表达%酪氨酸酶%黑色素%细胞学技术
基因錶達%酪氨痠酶%黑色素%細胞學技術
기인표체%락안산매%흑색소%세포학기술
目的研究pcDNA3.0-tyr在正常人成纤维母细胞株(GM0639细胞)中的表达.方法 pcDNA3.0-tyr真核表达质粒扩增、纯化后经测序、酶切鉴定;电穿孔法将pcDNA3.0-tyr转染GM细胞,RT-PCR检测;测定490 nm吸光度值,细胞爬片Fontana染色,证实酪氨酸酶基因表达及其表达水平.结果测序及酶切结果提示pcDNA3.0-tyr质粒含有酪氨酸酶全长cDNA片段;转染pcDNA3.0-tyr的细胞的PCR产物长度与预期长度一致,而转染pcDNA3.0空载体的细胞PCR产物无此条带;转染pcDNA3.0-tyr的GM细胞的A490显著高于转染空载体的细胞及未转染的GM细胞(P<0.001);转染pcDNA3.0-tyr的GM细胞Fontana染色于胞浆内见棕褐色银沉着颗粒,而转染pcDNA3.0空载体以及未转染的细胞缺乏此颗粒.结论 pcDNA3.0-tyr可体外转染GM0639细胞并成功表达,为后续研究奠定基础.
目的研究pcDNA3.0-tyr在正常人成纖維母細胞株(GM0639細胞)中的錶達.方法 pcDNA3.0-tyr真覈錶達質粒擴增、純化後經測序、酶切鑒定;電穿孔法將pcDNA3.0-tyr轉染GM細胞,RT-PCR檢測;測定490 nm吸光度值,細胞爬片Fontana染色,證實酪氨痠酶基因錶達及其錶達水平.結果測序及酶切結果提示pcDNA3.0-tyr質粒含有酪氨痠酶全長cDNA片段;轉染pcDNA3.0-tyr的細胞的PCR產物長度與預期長度一緻,而轉染pcDNA3.0空載體的細胞PCR產物無此條帶;轉染pcDNA3.0-tyr的GM細胞的A490顯著高于轉染空載體的細胞及未轉染的GM細胞(P<0.001);轉染pcDNA3.0-tyr的GM細胞Fontana染色于胞漿內見棕褐色銀沉著顆粒,而轉染pcDNA3.0空載體以及未轉染的細胞缺乏此顆粒.結論 pcDNA3.0-tyr可體外轉染GM0639細胞併成功錶達,為後續研究奠定基礎.
목적연구pcDNA3.0-tyr재정상인성섬유모세포주(GM0639세포)중적표체.방법 pcDNA3.0-tyr진핵표체질립확증、순화후경측서、매절감정;전천공법장pcDNA3.0-tyr전염GM세포,RT-PCR검측;측정490 nm흡광도치,세포파편Fontana염색,증실락안산매기인표체급기표체수평.결과측서급매절결과제시pcDNA3.0-tyr질립함유락안산매전장cDNA편단;전염pcDNA3.0-tyr적세포적PCR산물장도여예기장도일치,이전염pcDNA3.0공재체적세포PCR산물무차조대;전염pcDNA3.0-tyr적GM세포적A490현저고우전염공재체적세포급미전염적GM세포(P<0.001);전염pcDNA3.0-tyr적GM세포Fontana염색우포장내견종갈색은침착과립,이전염pcDNA3.0공재체이급미전염적세포결핍차과립.결론 pcDNA3.0-tyr가체외전염GM0639세포병성공표체,위후속연구전정기출.
