天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2007年
2期
96-98,插3
,共4页
杨波%李天德%陈惠鹏%胡显文%胥照平%张正光
楊波%李天德%陳惠鵬%鬍顯文%胥照平%張正光
양파%리천덕%진혜붕%호현문%서조평%장정광
尿纤溶酶原激活物%突变%基因表达%糖基化%血栓溶解疗法
尿纖溶酶原激活物%突變%基因錶達%糖基化%血栓溶解療法
뇨섬용매원격활물%돌변%기인표체%당기화%혈전용해요법
目的:构建一种非糖基化、抗凝血酶激活的尿激酶原突变体,并观察其表达及活性情况.方法:使用PCR扩增的方法,将302位天冬酰胺(Asn302)突变为丙氨酸(Ala302),去掉糖基化位点;将156位精氨酸(Arg156)突变为赖氨酸(Lys156),去掉凝血酶作用位点.将突变体基因转染到哺乳动物细胞中.收取无血清培养上清,并用纤维蛋白板溶解圈法鉴定活性.结果:PCR产物经琼脂糖电泳鉴定分子质量略大于1 200bp,与理论分子质量1 296 bp基本符合.转染成功的细胞株用于扩大培养.纤维蛋白板溶解圈法测定上清活性为295.58IU/mL.结论:非糖基化、抗凝血酶的尿激酶原突变体构建成功.转染后细胞生长良好,表达水平较高.
目的:構建一種非糖基化、抗凝血酶激活的尿激酶原突變體,併觀察其錶達及活性情況.方法:使用PCR擴增的方法,將302位天鼕酰胺(Asn302)突變為丙氨痠(Ala302),去掉糖基化位點;將156位精氨痠(Arg156)突變為賴氨痠(Lys156),去掉凝血酶作用位點.將突變體基因轉染到哺乳動物細胞中.收取無血清培養上清,併用纖維蛋白闆溶解圈法鑒定活性.結果:PCR產物經瓊脂糖電泳鑒定分子質量略大于1 200bp,與理論分子質量1 296 bp基本符閤.轉染成功的細胞株用于擴大培養.纖維蛋白闆溶解圈法測定上清活性為295.58IU/mL.結論:非糖基化、抗凝血酶的尿激酶原突變體構建成功.轉染後細胞生長良好,錶達水平較高.
목적:구건일충비당기화、항응혈매격활적뇨격매원돌변체,병관찰기표체급활성정황.방법:사용PCR확증적방법,장302위천동선알(Asn302)돌변위병안산(Ala302),거도당기화위점;장156위정안산(Arg156)돌변위뢰안산(Lys156),거도응혈매작용위점.장돌변체기인전염도포유동물세포중.수취무혈청배양상청,병용섬유단백판용해권법감정활성.결과:PCR산물경경지당전영감정분자질량략대우1 200bp,여이론분자질량1 296 bp기본부합.전염성공적세포주용우확대배양.섬유단백판용해권법측정상청활성위295.58IU/mL.결론:비당기화、항응혈매적뇨격매원돌변체구건성공.전염후세포생장량호,표체수평교고.
