生物医学工程学杂志
生物醫學工程學雜誌
생물의학공정학잡지
2007年
3期
636-640
,共5页
李红霞%陈建平%刘刚%姚卫%杨筠%刘杨椅%曾林子%田玉%王涛
李紅霞%陳建平%劉剛%姚衛%楊筠%劉楊椅%曾林子%田玉%王濤
리홍하%진건평%류강%요위%양균%류양의%증림자%전옥%왕도
结核分枝杆菌%cfp10-esat6融合基因%rCFP10-ESAT6融合蛋白%原核表达
結覈分枝桿菌%cfp10-esat6融閤基因%rCFP10-ESAT6融閤蛋白%原覈錶達
결핵분지간균%cfp10-esat6융합기인%rCFP10-ESAT6융합단백%원핵표체
构建结核分枝杆菌cfp10-esat6融合基因及其原核表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白CFP10-ESAT6.用基因拼接(GeneSOEing)法扩增cfp10-esat6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGcfp10-esat6.重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG(isopropy-β-D-thiogalactoside,异丙基硫代-β -D半乳糖苷)诱导表达约42kDa带谷胱苷肽硫转移酶(Glutathione-S-Transferases GST)蛋白标签的rCFP10-ESAT6融合蛋白,经谷胱苷肽硫转移酶融合蛋白纯化试剂盒得到纯化的融合蛋白,产物进行SDS-PAGE电泳、Western-blot鉴定.重组质粒pGcfp10-esat6中目的基因测序结果与报道序列相同;在大肠杆菌中以可溶性非包涵体形式表达;表达量约占菌体总蛋白的40%,表达蛋白纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白;Western印迹结果证实重组蛋白与确诊的结核病患者血清发生特异免疫反应.本研究成功构建了原核表达载体pGcfp10-esat6,获得了rCFP10-ESAT6融合蛋白,为rCFP10-ESAT6融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础.
構建結覈分枝桿菌cfp10-esat6融閤基因及其原覈錶達載體,在大腸桿菌中錶達融閤蛋白CFP10-ESAT6.用基因拼接(GeneSOEing)法擴增cfp10-esat6融閤基因,併將其定嚮剋隆至原覈錶達載體pGEX-4T-1,構建原覈錶達重組質粒pGcfp10-esat6.重組子經限製性內切酶分析、聚閤酶鏈式反應及測序鑒定後轉化宿主菌大腸桿菌BL21,IPTG(isopropy-β-D-thiogalactoside,異丙基硫代-β -D半乳糖苷)誘導錶達約42kDa帶穀胱苷肽硫轉移酶(Glutathione-S-Transferases GST)蛋白標籤的rCFP10-ESAT6融閤蛋白,經穀胱苷肽硫轉移酶融閤蛋白純化試劑盒得到純化的融閤蛋白,產物進行SDS-PAGE電泳、Western-blot鑒定.重組質粒pGcfp10-esat6中目的基因測序結果與報道序列相同;在大腸桿菌中以可溶性非包涵體形式錶達;錶達量約佔菌體總蛋白的40%,錶達蛋白純化後穫得純度為90%左右的重組蛋白;Western印跡結果證實重組蛋白與確診的結覈病患者血清髮生特異免疫反應.本研究成功構建瞭原覈錶達載體pGcfp10-esat6,穫得瞭rCFP10-ESAT6融閤蛋白,為rCFP10-ESAT6融閤蛋白在結覈病診斷中的應用奠定瞭基礎.
구건결핵분지간균cfp10-esat6융합기인급기원핵표체재체,재대장간균중표체융합단백CFP10-ESAT6.용기인병접(GeneSOEing)법확증cfp10-esat6융합기인,병장기정향극륭지원핵표체재체pGEX-4T-1,구건원핵표체중조질립pGcfp10-esat6.중조자경한제성내절매분석、취합매련식반응급측서감정후전화숙주균대장간균BL21,IPTG(isopropy-β-D-thiogalactoside,이병기류대-β -D반유당감)유도표체약42kDa대곡광감태류전이매(Glutathione-S-Transferases GST)단백표첨적rCFP10-ESAT6융합단백,경곡광감태류전이매융합단백순화시제합득도순화적융합단백,산물진행SDS-PAGE전영、Western-blot감정.중조질립pGcfp10-esat6중목적기인측서결과여보도서렬상동;재대장간균중이가용성비포함체형식표체;표체량약점균체총단백적40%,표체단백순화후획득순도위90%좌우적중조단백;Western인적결과증실중조단백여학진적결핵병환자혈청발생특이면역반응.본연구성공구건료원핵표체재체pGcfp10-esat6,획득료rCFP10-ESAT6융합단백,위rCFP10-ESAT6융합단백재결핵병진단중적응용전정료기출.
