苏州大学学报（医学版）
囌州大學學報（醫學版）
소주대학학보（의학판）
SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE
2008年
2期
218-221,225
,共5页
蔡东晖%石建军%叶荣%陈学进
蔡東暉%石建軍%葉榮%陳學進
채동휘%석건군%협영%진학진
细菌人工染色体%缺口修复载体%PCR融和%重组
細菌人工染色體%缺口脩複載體%PCR融和%重組
세균인공염색체%결구수복재체%PCR융화%중조
目的 运用基于PCR的重叠区延伸法构建缺口修复载体,通过同源重组的方式从细菌人工染色体(BACs)中亚克隆DNA片段.方法 用基于PCR的重叠区延伸法将线性化质粒骨架分子、较长的上游和下游同源臂(200～500bp)串联起来构建成缺口修复载体.将此载体电击转入含有BAC的EL350菌中,经热激诱导Red重组酶瞬时表达,使缺口修复载体与BAC发生同源重组.结果 重叠区延伸法构建的两个缺口修复载体分别成功地从BAC中亚克隆得到目的DNA片断.结论 该方法省去了酶切、连接、转化等繁琐的克隆步骤,大大缩短了实验周期,提高了实验效率,为基因组BAC测序过程中的缺口封闭及复杂的打靶载体构建提供了较为便捷的方法.
目的 運用基于PCR的重疊區延伸法構建缺口脩複載體,通過同源重組的方式從細菌人工染色體(BACs)中亞剋隆DNA片段.方法 用基于PCR的重疊區延伸法將線性化質粒骨架分子、較長的上遊和下遊同源臂(200～500bp)串聯起來構建成缺口脩複載體.將此載體電擊轉入含有BAC的EL350菌中,經熱激誘導Red重組酶瞬時錶達,使缺口脩複載體與BAC髮生同源重組.結果 重疊區延伸法構建的兩箇缺口脩複載體分彆成功地從BAC中亞剋隆得到目的DNA片斷.結論 該方法省去瞭酶切、連接、轉化等繁瑣的剋隆步驟,大大縮短瞭實驗週期,提高瞭實驗效率,為基因組BAC測序過程中的缺口封閉及複雜的打靶載體構建提供瞭較為便捷的方法.
목적 운용기우PCR적중첩구연신법구건결구수복재체,통과동원중조적방식종세균인공염색체(BACs)중아극륭DNA편단.방법 용기우PCR적중첩구연신법장선성화질립골가분자、교장적상유화하유동원비(200～500bp)천련기래구건성결구수복재체.장차재체전격전입함유BAC적EL350균중,경열격유도Red중조매순시표체,사결구수복재체여BAC발생동원중조.결과 중첩구연신법구건적량개결구수복재체분별성공지종BAC중아극륭득도목적DNA편단.결론 해방법성거료매절、련접、전화등번쇄적극륭보취,대대축단료실험주기,제고료실험효솔,위기인조BAC측서과정중적결구봉폐급복잡적타파재체구건제공료교위편첩적방법.
