山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
26期
39-41
,共3页
陈辉%杜春艳%谢庆瑞%马慧洁%张钦宪
陳輝%杜春豔%謝慶瑞%馬慧潔%張欽憲
진휘%두춘염%사경서%마혜길%장흠헌
SV40T抗原%转染%真核载体
SV40T抗原%轉染%真覈載體
SV40T항원%전염%진핵재체
构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV和非特异性表达载体pcDNA3.1(-)/SV,行酶切及测序鉴定.用脂质体转染法将构建的载体导入食管癌细胞EC9706细胞株,RT-PCR法检测SV40T抗原基因的表达,免疫组化法检测蛋白表达情况. 结果限制性内切酶分析与测序结果示H+/K+ATP酶β亚基启动子与SV40T基因成功构建于pcDNA3.1(-)真核表达载体中;转染细胞提取基因组DNA及总RNA,分别经PCR和RT-PCR反应扩增出618 bp和272 bp的特异性片段,非特异性表达载体pcDNA3.1(-)/SV瞬时转染时SV40T抗原表达阳性,而特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV转染组蛋白表达阴性.认为构建特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV并在食管癌细胞EC9706中检测其表达为转基因肿瘤动物模型的建立奠定了理论基础.
構建胃壁細胞特異性錶達載體pcDNA3.1(-)/HKSV和非特異性錶達載體pcDNA3.1(-)/SV,行酶切及測序鑒定.用脂質體轉染法將構建的載體導入食管癌細胞EC9706細胞株,RT-PCR法檢測SV40T抗原基因的錶達,免疫組化法檢測蛋白錶達情況. 結果限製性內切酶分析與測序結果示H+/K+ATP酶β亞基啟動子與SV40T基因成功構建于pcDNA3.1(-)真覈錶達載體中;轉染細胞提取基因組DNA及總RNA,分彆經PCR和RT-PCR反應擴增齣618 bp和272 bp的特異性片段,非特異性錶達載體pcDNA3.1(-)/SV瞬時轉染時SV40T抗原錶達暘性,而特異性錶達載體pcDNA3.1(-)/HKSV轉染組蛋白錶達陰性.認為構建特異性錶達載體pcDNA3.1(-)/HKSV併在食管癌細胞EC9706中檢測其錶達為轉基因腫瘤動物模型的建立奠定瞭理論基礎.
구건위벽세포특이성표체재체pcDNA3.1(-)/HKSV화비특이성표체재체pcDNA3.1(-)/SV,행매절급측서감정.용지질체전염법장구건적재체도입식관암세포EC9706세포주,RT-PCR법검측SV40T항원기인적표체,면역조화법검측단백표체정황. 결과한제성내절매분석여측서결과시H+/K+ATP매β아기계동자여SV40T기인성공구건우pcDNA3.1(-)진핵표체재체중;전염세포제취기인조DNA급총RNA,분별경PCR화RT-PCR반응확증출618 bp화272 bp적특이성편단,비특이성표체재체pcDNA3.1(-)/SV순시전염시SV40T항원표체양성,이특이성표체재체pcDNA3.1(-)/HKSV전염조단백표체음성.인위구건특이성표체재체pcDNA3.1(-)/HKSV병재식관암세포EC9706중검측기표체위전기인종류동물모형적건립전정료이론기출.
