中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2009年
1期
28-32
,共5页
徐文停%汤亭亭%边振宇%范启明
徐文停%湯亭亭%邊振宇%範啟明
서문정%탕정정%변진우%범계명
间质干细胞%骨肿瘤%细胞运动%细胞增殖%趋化因子%CC
間質榦細胞%骨腫瘤%細胞運動%細胞增殖%趨化因子%CC
간질간세포%골종류%세포운동%세포증식%추화인자%CC
目的 研究人间充质干细胞(hMSC)对骨肉瘤Saos-2 细胞迁移与增殖的影响及其机制.方法 取传代培养的hMSC 和Saos-2 细胞,分别制备hMSC 条件培养基(MSC-CM)和Saos-2 细胞条件培养基(Saos-2-CM).采用免疫荧光细胞化学方法 和双抗体夹心ELISA 方法 分别检测hMSC CCL5 趋化因子的表达及其表达水平,蛋白质免疫印迹方法 检测Saos-2 细胞CCR5 因子的表达.按条件培养基的不同将Saos-2 细胞分为4 组:含10% 胎牛血清的α-MEM 培养基(阴性对照)、Saos-2-CM(阳性对照)、MSC-CM、含24 ng/ml 兔抗人CCL5 抗体的MSC-CM(MSC-CM/anti-CCL5 Ab),应用Transwell实验和噻唑蓝(MTT)法分别检测hMSC 对Saos-2 细胞迁移与增殖能力的影响.实验均重复3 次.结果 免疫荧光细胞化学方法 和双抗体夹心ELISA 检测显示,hMSC CCL5 因子表达阳性且其表达水平为3.68 pg/ml.蛋白质免疫印迹检测显示,Saos-2 细胞CCR5因子表达阳性.Transwell 实验和MTT 检测结果 显示,MSC-CM 能明显促进Saos-2 细胞的迁移与增殖,而MSC-CM/anti- CCL5 Ab 组Saos-2 细胞的迁移与增殖能力均明显下降,2 组间差异均有统计学意义(分别为P < 0.01,P < 0.05).结论CCL5/CCR5 信号途径在hMSC 促进Saos-2 细胞迁移与增殖过程中发挥关键作用,抑制CCL5 趋化因子的表达可明显降低Saos-2 细胞的迁移与增殖能力.
目的 研究人間充質榦細胞(hMSC)對骨肉瘤Saos-2 細胞遷移與增殖的影響及其機製.方法 取傳代培養的hMSC 和Saos-2 細胞,分彆製備hMSC 條件培養基(MSC-CM)和Saos-2 細胞條件培養基(Saos-2-CM).採用免疫熒光細胞化學方法 和雙抗體夾心ELISA 方法 分彆檢測hMSC CCL5 趨化因子的錶達及其錶達水平,蛋白質免疫印跡方法 檢測Saos-2 細胞CCR5 因子的錶達.按條件培養基的不同將Saos-2 細胞分為4 組:含10% 胎牛血清的α-MEM 培養基(陰性對照)、Saos-2-CM(暘性對照)、MSC-CM、含24 ng/ml 兔抗人CCL5 抗體的MSC-CM(MSC-CM/anti-CCL5 Ab),應用Transwell實驗和噻唑藍(MTT)法分彆檢測hMSC 對Saos-2 細胞遷移與增殖能力的影響.實驗均重複3 次.結果 免疫熒光細胞化學方法 和雙抗體夾心ELISA 檢測顯示,hMSC CCL5 因子錶達暘性且其錶達水平為3.68 pg/ml.蛋白質免疫印跡檢測顯示,Saos-2 細胞CCR5因子錶達暘性.Transwell 實驗和MTT 檢測結果 顯示,MSC-CM 能明顯促進Saos-2 細胞的遷移與增殖,而MSC-CM/anti- CCL5 Ab 組Saos-2 細胞的遷移與增殖能力均明顯下降,2 組間差異均有統計學意義(分彆為P < 0.01,P < 0.05).結論CCL5/CCR5 信號途徑在hMSC 促進Saos-2 細胞遷移與增殖過程中髮揮關鍵作用,抑製CCL5 趨化因子的錶達可明顯降低Saos-2 細胞的遷移與增殖能力.
목적 연구인간충질간세포(hMSC)대골육류Saos-2 세포천이여증식적영향급기궤제.방법 취전대배양적hMSC 화Saos-2 세포,분별제비hMSC 조건배양기(MSC-CM)화Saos-2 세포조건배양기(Saos-2-CM).채용면역형광세포화학방법 화쌍항체협심ELISA 방법 분별검측hMSC CCL5 추화인자적표체급기표체수평,단백질면역인적방법 검측Saos-2 세포CCR5 인자적표체.안조건배양기적불동장Saos-2 세포분위4 조:함10% 태우혈청적α-MEM 배양기(음성대조)、Saos-2-CM(양성대조)、MSC-CM、함24 ng/ml 토항인CCL5 항체적MSC-CM(MSC-CM/anti-CCL5 Ab),응용Transwell실험화새서람(MTT)법분별검측hMSC 대Saos-2 세포천이여증식능력적영향.실험균중복3 차.결과 면역형광세포화학방법 화쌍항체협심ELISA 검측현시,hMSC CCL5 인자표체양성차기표체수평위3.68 pg/ml.단백질면역인적검측현시,Saos-2 세포CCR5인자표체양성.Transwell 실험화MTT 검측결과 현시,MSC-CM 능명현촉진Saos-2 세포적천이여증식,이MSC-CM/anti- CCL5 Ab 조Saos-2 세포적천이여증식능력균명현하강,2 조간차이균유통계학의의(분별위P < 0.01,P < 0.05).결론CCL5/CCR5 신호도경재hMSC 촉진Saos-2 세포천이여증식과정중발휘관건작용,억제CCL5 추화인자적표체가명현강저Saos-2 세포적천이여증식능력.
