西南农业学报
西南農業學報
서남농업학보
SOUTHWEST CHINA JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
2期
697-702
,共6页
熊文婕%谢芝勋%刘加波%庞耀姗%谢志勤%邓显文%谢丽基
熊文婕%謝芝勛%劉加波%龐耀姍%謝誌勤%鄧顯文%謝麗基
웅문첩%사지훈%류가파%방요산%사지근%산현문%사려기
禽呼肠孤病毒%shRNA%干扰
禽呼腸孤病毒%shRNA%榦擾
금호장고병독%shRNA%간우
禽呼肠孤病毒σC基因是病毒粘附蛋白,σNS基因具有结合单链RNA活性.根据siRNA靶序列设计原则,设计并合成siRNA模板并克隆到shRNA表达载体pSilencer-CMV 4.1 neo.分别构建了针对σC基因的shRNA载体C1、C2、C3和针对σNS基因的shRNA载体NS1、NS2、NS3.将构建的shRNA载体和阴性对照分别与表达σC和σNS基因的融合蛋白的真核表达载体pEG-FP-σC及pEGFP-σNS共转染DF-1细胞.荧光显微镜观察结果表明,6个shRNA片段不同程度地抑制各自融合蛋白的表达.Realtime PCR检测结果表明,C3和NS1体外干扰病毒复制的效果最佳.
禽呼腸孤病毒σC基因是病毒粘附蛋白,σNS基因具有結閤單鏈RNA活性.根據siRNA靶序列設計原則,設計併閤成siRNA模闆併剋隆到shRNA錶達載體pSilencer-CMV 4.1 neo.分彆構建瞭針對σC基因的shRNA載體C1、C2、C3和針對σNS基因的shRNA載體NS1、NS2、NS3.將構建的shRNA載體和陰性對照分彆與錶達σC和σNS基因的融閤蛋白的真覈錶達載體pEG-FP-σC及pEGFP-σNS共轉染DF-1細胞.熒光顯微鏡觀察結果錶明,6箇shRNA片段不同程度地抑製各自融閤蛋白的錶達.Realtime PCR檢測結果錶明,C3和NS1體外榦擾病毒複製的效果最佳.
금호장고병독σC기인시병독점부단백,σNS기인구유결합단련RNA활성.근거siRNA파서렬설계원칙,설계병합성siRNA모판병극륭도shRNA표체재체pSilencer-CMV 4.1 neo.분별구건료침대σC기인적shRNA재체C1、C2、C3화침대σNS기인적shRNA재체NS1、NS2、NS3.장구건적shRNA재체화음성대조분별여표체σC화σNS기인적융합단백적진핵표체재체pEG-FP-σC급pEGFP-σNS공전염DF-1세포.형광현미경관찰결과표명,6개shRNA편단불동정도지억제각자융합단백적표체.Realtime PCR검측결과표명,C3화NS1체외간우병독복제적효과최가.
