实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2012年
10期
760-762
,共3页
分泌型白细胞蛋白酶抑制蛋白%弹性蛋白酶%炎性介质%转录因子
分泌型白細胞蛋白酶抑製蛋白%彈性蛋白酶%炎性介質%轉錄因子
분비형백세포단백매억제단백%탄성단백매%염성개질%전록인자
目的 克隆分泌型白细胞蛋白酶抑制(SLPI)蛋白基因并表达人SLPI重组蛋白,探讨其拮抗中性粒细胞释放炎性介质的作用.方法 抽提人外周血中性粒细胞mRNA,克隆SLPI基因,构建质粒,转染后抽提纯化蛋白,实验分组后,分别进行不同剂量的SLPI和内毒素(LPS)共处理中性粒细胞.A组:正常对照组(不予LPS和重组SLPI蛋白处理)；B组:LPS处理组(加终质量浓度0.001 g·L-1的LPS)；C组:低剂量重组SLPI蛋白干预组(加重组SLPI蛋白0.010 g·L-1和终质量浓度0.001 g·L-1的LPS)；D组:中剂量重组SLPI蛋白干预组(加重组SLPI蛋白0.050 g·L-1和终质量浓度0.001 g·L-1的LPS)；E组:高剂量重组SLPI蛋白干预组(加重组SLPI蛋白0.100 g·L-1和终质量浓度0.001 g·L-1的LPS).然后进行中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性实验、淡性介质释放实验以及转录因子STAT3活性实验,分别测定NE活性、炎性介质IL-6/IL-8表达量及转录因子STAT3的DNA结合活性.结果 成功构建SLPI基因全长cDNA的真核表达载体,发现重组SLPI蛋白呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的NE活性[(17.78±0.54)nmol·L-1 vs (5.46±0.12) nmol·L-1,P＜0.05].重组SLPI蛋白也显著抑制LPS诱导的炎性介质IL-6[ (179.51±6.61) ng·L-1vs( 63.13±4.55) ng· L-1,P＜0.05]和IL-8[( 192.98±7.65) ng· L-1 vs(103.42±4.76)ng · L-1,P＜0.05]的释放及转录因子STAT3的DNA结合力升高.结论 SLPI可有效抑制NE活性,减轻炎性损伤.
目的 剋隆分泌型白細胞蛋白酶抑製(SLPI)蛋白基因併錶達人SLPI重組蛋白,探討其拮抗中性粒細胞釋放炎性介質的作用.方法 抽提人外週血中性粒細胞mRNA,剋隆SLPI基因,構建質粒,轉染後抽提純化蛋白,實驗分組後,分彆進行不同劑量的SLPI和內毒素(LPS)共處理中性粒細胞.A組:正常對照組(不予LPS和重組SLPI蛋白處理)；B組:LPS處理組(加終質量濃度0.001 g·L-1的LPS)；C組:低劑量重組SLPI蛋白榦預組(加重組SLPI蛋白0.010 g·L-1和終質量濃度0.001 g·L-1的LPS)；D組:中劑量重組SLPI蛋白榦預組(加重組SLPI蛋白0.050 g·L-1和終質量濃度0.001 g·L-1的LPS)；E組:高劑量重組SLPI蛋白榦預組(加重組SLPI蛋白0.100 g·L-1和終質量濃度0.001 g·L-1的LPS).然後進行中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)活性實驗、淡性介質釋放實驗以及轉錄因子STAT3活性實驗,分彆測定NE活性、炎性介質IL-6/IL-8錶達量及轉錄因子STAT3的DNA結閤活性.結果 成功構建SLPI基因全長cDNA的真覈錶達載體,髮現重組SLPI蛋白呈劑量依賴性地抑製LPS誘導的NE活性[(17.78±0.54)nmol·L-1 vs (5.46±0.12) nmol·L-1,P＜0.05].重組SLPI蛋白也顯著抑製LPS誘導的炎性介質IL-6[ (179.51±6.61) ng·L-1vs( 63.13±4.55) ng· L-1,P＜0.05]和IL-8[( 192.98±7.65) ng· L-1 vs(103.42±4.76)ng · L-1,P＜0.05]的釋放及轉錄因子STAT3的DNA結閤力升高.結論 SLPI可有效抑製NE活性,減輕炎性損傷.
목적 극륭분비형백세포단백매억제(SLPI)단백기인병표체인SLPI중조단백,탐토기길항중성립세포석방염성개질적작용.방법 추제인외주혈중성립세포mRNA,극륭SLPI기인,구건질립,전염후추제순화단백,실험분조후,분별진행불동제량적SLPI화내독소(LPS)공처리중성립세포.A조:정상대조조(불여LPS화중조SLPI단백처리)；B조:LPS처리조(가종질량농도0.001 g·L-1적LPS)；C조:저제량중조SLPI단백간예조(가중조SLPI단백0.010 g·L-1화종질량농도0.001 g·L-1적LPS)；D조:중제량중조SLPI단백간예조(가중조SLPI단백0.050 g·L-1화종질량농도0.001 g·L-1적LPS)；E조:고제량중조SLPI단백간예조(가중조SLPI단백0.100 g·L-1화종질량농도0.001 g·L-1적LPS).연후진행중성립세포탄성단백매(NE)활성실험、담성개질석방실험이급전록인자STAT3활성실험,분별측정NE활성、염성개질IL-6/IL-8표체량급전록인자STAT3적DNA결합활성.결과 성공구건SLPI기인전장cDNA적진핵표체재체,발현중조SLPI단백정제량의뢰성지억제LPS유도적NE활성[(17.78±0.54)nmol·L-1 vs (5.46±0.12) nmol·L-1,P＜0.05].중조SLPI단백야현저억제LPS유도적염성개질IL-6[ (179.51±6.61) ng·L-1vs( 63.13±4.55) ng· L-1,P＜0.05]화IL-8[( 192.98±7.65) ng· L-1 vs(103.42±4.76)ng · L-1,P＜0.05]적석방급전록인자STAT3적DNA결합력승고.결론 SLPI가유효억제NE활성,감경염성손상.
