华东理工大学学报（自然科学版）
華東理工大學學報（自然科學版）
화동리공대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF EAST CHINA UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE)
2006年
8期
933-938
,共6页
口蹄疫病毒%噬菌体-scFv%可溶性scFv%噬菌体展示技术
口蹄疫病毒%噬菌體-scFv%可溶性scFv%噬菌體展示技術
구제역병독%서균체-scFv%가용성scFv%서균체전시기술
利用重组DNA技术在抗口蹄疫病毒单克隆抗体1C7 VH基因和VL基因之间导入一段连接肽[(Gly4Ser)3],采用重叠延伸拼接法,经聚合酶链反应(PCR)扩增获得scFv基因.将scFv基因克隆至噬菌粒pCANTAB 5E载体,转化E.coli TG1,构建噬菌体抗体文库.用M13KO7辅助噬菌体挽救及固相口蹄疫病毒(FMDV)抗原对噬菌体抗体文库的三轮"吸附-洗脱-扩增"的淘洗,筛选出scFv阳性克隆.将阳性克隆转化E.coli BH2151,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导可溶性scFv蛋白的表达.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测表明:scFv克隆表达的phage-scFv及可溶性scFv与FMDV亲和力高,特异性强.
利用重組DNA技術在抗口蹄疫病毒單剋隆抗體1C7 VH基因和VL基因之間導入一段連接肽[(Gly4Ser)3],採用重疊延伸拼接法,經聚閤酶鏈反應(PCR)擴增穫得scFv基因.將scFv基因剋隆至噬菌粒pCANTAB 5E載體,轉化E.coli TG1,構建噬菌體抗體文庫.用M13KO7輔助噬菌體輓救及固相口蹄疫病毒(FMDV)抗原對噬菌體抗體文庫的三輪"吸附-洗脫-擴增"的淘洗,篩選齣scFv暘性剋隆.將暘性剋隆轉化E.coli BH2151,通過異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導可溶性scFv蛋白的錶達.酶聯免疫吸附實驗(ELISA)檢測錶明:scFv剋隆錶達的phage-scFv及可溶性scFv與FMDV親和力高,特異性彊.
이용중조DNA기술재항구제역병독단극륭항체1C7 VH기인화VL기인지간도입일단련접태[(Gly4Ser)3],채용중첩연신병접법,경취합매련반응(PCR)확증획득scFv기인.장scFv기인극륭지서균립pCANTAB 5E재체,전화E.coli TG1,구건서균체항체문고.용M13KO7보조서균체만구급고상구제역병독(FMDV)항원대서균체항체문고적삼륜"흡부-세탈-확증"적도세,사선출scFv양성극륭.장양성극륭전화E.coli BH2151,통과이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도가용성scFv단백적표체.매련면역흡부실험(ELISA)검측표명:scFv극륭표체적phage-scFv급가용성scFv여FMDV친화력고,특이성강.
