热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2008年
3期
201-204
,共4页
赵玉梅%王穗海%潘华政%黄湘%李明
趙玉梅%王穗海%潘華政%黃湘%李明
조옥매%왕수해%반화정%황상%리명
PA28γ%原核表达%纯化%多克隆血清
PA28γ%原覈錶達%純化%多剋隆血清
PA28γ%원핵표체%순화%다극륭혈청
目的 蛋白酶体激活亚单位3(PA28γ)的表达、纯化及其多克隆抗体的制备.方法 利用pGEX-4T-1原核表达系统表达PA2γ蛋白,经T-A克隆、亚克隆至pGEX-4T-1表达载体;将重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR(DE3),诱导表达PA28γ蛋白,通过Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白(GST-PA28γ);并用其免疫BALB/c小鼠制备多抗血清,对表达产物和多抗血清进行Western-blot鉴定.结果 成功构建原核表达质粒PA28γ/pGEX-4T-1,且测序正确;获得高纯度的PA28γ蛋白及其高效价的多克隆抗体血清.并得到Western-blot证实.结论 成功利用基因重组技术制备了PA28γ蛋白和抗PA28γ多克隆血清,为该蛋白的生物学功能研究奠定了基础.
目的 蛋白酶體激活亞單位3(PA28γ)的錶達、純化及其多剋隆抗體的製備.方法 利用pGEX-4T-1原覈錶達繫統錶達PA2γ蛋白,經T-A剋隆、亞剋隆至pGEX-4T-1錶達載體;將重組質粒轉化到大腸桿菌BL-21-STAR(DE3),誘導錶達PA28γ蛋白,通過Glutathione Sepharose 4B親和層析純化融閤蛋白(GST-PA28γ);併用其免疫BALB/c小鼠製備多抗血清,對錶達產物和多抗血清進行Western-blot鑒定.結果 成功構建原覈錶達質粒PA28γ/pGEX-4T-1,且測序正確;穫得高純度的PA28γ蛋白及其高效價的多剋隆抗體血清.併得到Western-blot證實.結論 成功利用基因重組技術製備瞭PA28γ蛋白和抗PA28γ多剋隆血清,為該蛋白的生物學功能研究奠定瞭基礎.
목적 단백매체격활아단위3(PA28γ)적표체、순화급기다극륭항체적제비.방법 이용pGEX-4T-1원핵표체계통표체PA2γ단백,경T-A극륭、아극륭지pGEX-4T-1표체재체;장중조질립전화도대장간균BL-21-STAR(DE3),유도표체PA28γ단백,통과Glutathione Sepharose 4B친화층석순화융합단백(GST-PA28γ);병용기면역BALB/c소서제비다항혈청,대표체산물화다항혈청진행Western-blot감정.결과 성공구건원핵표체질립PA28γ/pGEX-4T-1,차측서정학;획득고순도적PA28γ단백급기고효개적다극륭항체혈청.병득도Western-blot증실.결론 성공이용기인중조기술제비료PA28γ단백화항PA28γ다극륭혈청,위해단백적생물학공능연구전정료기출.
