西北国防医学杂志
西北國防醫學雜誌
서북국방의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF NATIONAL DEFENDING FORCES IN NORTHWEST CHINA
2006年
5期
321-324
,共4页
杨国嵘%朱任之%何晓霞%薛永杰%贺雪姣%郁荣
楊國嶸%硃任之%何曉霞%薛永傑%賀雪姣%鬱榮
양국영%주임지%하효하%설영걸%하설교%욱영
实验室诊断%胶原沉积抑制因子%探针%制备%聚合酶链反应
實驗室診斷%膠原沉積抑製因子%探針%製備%聚閤酶鏈反應
실험실진단%효원침적억제인자%탐침%제비%취합매련반응
目的:制备胶原沉积抑制因子(decorin)cDNA探针并初步检测组织中decorin mRNA.方法:用聚合酶链反应(PCR)法将地高辛掺入decorin cDNA片段;琼脂糖凝胶电泳观察地高辛掺入对decorin cDNA片段分子量的影响;乙醇沉淀法纯化探针、紫外分光光度法测定探针含量;斑点杂交法检测探针的灵敏度和特异性;原位杂交法检测石蜡包埋组织中decorin mRNA.结果:成功获得了地高辛标记decorin cDNA探针,但掺入DIG后使得同一decorin片段分子量增大;一次100 μl PCR可产生11 μg标记探针;探针的灵敏度为19 pg;探针的特异性因待测分子中decorin片段的比例而不同,当以1 005 bp的decorin片段和pGEX-3X-decorin为待测基因时,特异性分别为2和20 pg;标记探针可显示不同组织中decorin mRNA.结论:用PCR法高效地制备了灵敏度和特异性都很高的地高辛标记decorin cDNA探针,并成功地检测了不同组织中decorin mRNA水平.
目的:製備膠原沉積抑製因子(decorin)cDNA探針併初步檢測組織中decorin mRNA.方法:用聚閤酶鏈反應(PCR)法將地高辛摻入decorin cDNA片段;瓊脂糖凝膠電泳觀察地高辛摻入對decorin cDNA片段分子量的影響;乙醇沉澱法純化探針、紫外分光光度法測定探針含量;斑點雜交法檢測探針的靈敏度和特異性;原位雜交法檢測石蠟包埋組織中decorin mRNA.結果:成功穫得瞭地高辛標記decorin cDNA探針,但摻入DIG後使得同一decorin片段分子量增大;一次100 μl PCR可產生11 μg標記探針;探針的靈敏度為19 pg;探針的特異性因待測分子中decorin片段的比例而不同,噹以1 005 bp的decorin片段和pGEX-3X-decorin為待測基因時,特異性分彆為2和20 pg;標記探針可顯示不同組織中decorin mRNA.結論:用PCR法高效地製備瞭靈敏度和特異性都很高的地高辛標記decorin cDNA探針,併成功地檢測瞭不同組織中decorin mRNA水平.
목적:제비효원침적억제인자(decorin)cDNA탐침병초보검측조직중decorin mRNA.방법:용취합매련반응(PCR)법장지고신참입decorin cDNA편단;경지당응효전영관찰지고신참입대decorin cDNA편단분자량적영향;을순침정법순화탐침、자외분광광도법측정탐침함량;반점잡교법검측탐침적령민도화특이성;원위잡교법검측석사포매조직중decorin mRNA.결과:성공획득료지고신표기decorin cDNA탐침,단참입DIG후사득동일decorin편단분자량증대;일차100 μl PCR가산생11 μg표기탐침;탐침적령민도위19 pg;탐침적특이성인대측분자중decorin편단적비례이불동,당이1 005 bp적decorin편단화pGEX-3X-decorin위대측기인시,특이성분별위2화20 pg;표기탐침가현시불동조직중decorin mRNA.결론:용PCR법고효지제비료령민도화특이성도흔고적지고신표기decorin cDNA탐침,병성공지검측료불동조직중decorin mRNA수평.
