中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2008年
12期
1075-1079
,共5页
许如苏%陈茹%林彩华%杨梓坚%陈冠武
許如囌%陳茹%林綵華%楊梓堅%陳冠武
허여소%진여%림채화%양재견%진관무
副溶血性弧菌%LUXTM荧光PCR%TaqMan荧光PCR
副溶血性弧菌%LUXTM熒光PCR%TaqMan熒光PCR
부용혈성호균%LUXTM형광PCR%TaqMan형광PCR
根据LUXTM荧光PCR技术原理,针对副溶血性弧菌toxR基因的保守序列,设计了特异的LUXTM荧光标记引物,通过优化反应条件与参数,建立了可快速检测副溶血性弧菌的LUXTM荧光PCR方法.结果显示,该方法高度敏感,对纯菌的检测低限达到每个反应体系7个菌(CFU),经6 h增菌培养后检测,对样品的检测低限(CFU)达到100/25 g;特异性强,对副溶血性弧菌2株标准菌株和10株参考菌株的检验均呈阳性,而对霍乱弧菌等28株非目标菌的检测均呈阴性;重复性好,定量检测的批内和批间变异系数均小于1%.应用此方法检测水产样品103份,检出阳性样品6份,与TaqMan荧光PCR和SN标准的检测结果完全一致.用此方法可在8 h内完成对样品中副溶血性弧菌的检测,其检测的快速性、敏感性和特异性与TaqMan荧光PCR技术相当,但检测成本更低.
根據LUXTM熒光PCR技術原理,針對副溶血性弧菌toxR基因的保守序列,設計瞭特異的LUXTM熒光標記引物,通過優化反應條件與參數,建立瞭可快速檢測副溶血性弧菌的LUXTM熒光PCR方法.結果顯示,該方法高度敏感,對純菌的檢測低限達到每箇反應體繫7箇菌(CFU),經6 h增菌培養後檢測,對樣品的檢測低限(CFU)達到100/25 g;特異性彊,對副溶血性弧菌2株標準菌株和10株參攷菌株的檢驗均呈暘性,而對霍亂弧菌等28株非目標菌的檢測均呈陰性;重複性好,定量檢測的批內和批間變異繫數均小于1%.應用此方法檢測水產樣品103份,檢齣暘性樣品6份,與TaqMan熒光PCR和SN標準的檢測結果完全一緻.用此方法可在8 h內完成對樣品中副溶血性弧菌的檢測,其檢測的快速性、敏感性和特異性與TaqMan熒光PCR技術相噹,但檢測成本更低.
근거LUXTM형광PCR기술원리,침대부용혈성호균toxR기인적보수서렬,설계료특이적LUXTM형광표기인물,통과우화반응조건여삼수,건립료가쾌속검측부용혈성호균적LUXTM형광PCR방법.결과현시,해방법고도민감,대순균적검측저한체도매개반응체계7개균(CFU),경6 h증균배양후검측,대양품적검측저한(CFU)체도100/25 g;특이성강,대부용혈성호균2주표준균주화10주삼고균주적검험균정양성,이대곽란호균등28주비목표균적검측균정음성;중복성호,정량검측적비내화비간변이계수균소우1%.응용차방법검측수산양품103빈,검출양성양품6빈,여TaqMan형광PCR화SN표준적검측결과완전일치.용차방법가재8 h내완성대양품중부용혈성호균적검측,기검측적쾌속성、민감성화특이성여TaqMan형광PCR기술상당,단검측성본경저.
