江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
1期
18-23
,共6页
岳显可%蔡应繁%刘毅%王微娜%杨玲%周翠平
嶽顯可%蔡應繁%劉毅%王微娜%楊玲%週翠平
악현가%채응번%류의%왕미나%양령%주취평
棉花%腺体%锌结合蛋白质%原核表达%Western blotting
棉花%腺體%鋅結閤蛋白質%原覈錶達%Western blotting
면화%선체%자결합단백질%원핵표체%Western blotting
为了解棉花锌结合蛋白的理化性质及结构特征,从已构建完成的棉花(湘棉18)腺体形成时期的cDNA均一化文库中筛选出1个棉花锌结合蛋白质(Zinc binding protein,ZnBP)基因的全长cDNA序列.经过克隆、测序及序列分析,发现该片段包含1个完整开放阅读框,长654个碱基,编码217个氨基酸,蛋白质分子量为2.46×104,等电点为9.33.以湘棉18叶片DNA为模板,通过PCR扩增分离获得棉花ZnBP基因.经测序拼接,得到1 731 bp的棉花gDNA片段,编码区含有3个内含子.利用pET-28a(+)载体,开展了该基因的原核表达研究,在37℃、异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)终浓度1 mmol/L、诱导时间8h和转速150r/min条件下,实现最优表达；SDS-PAGE凝胶电泳及Western blotting检测分析结果表明,蛋白表达正确.
為瞭解棉花鋅結閤蛋白的理化性質及結構特徵,從已構建完成的棉花(湘棉18)腺體形成時期的cDNA均一化文庫中篩選齣1箇棉花鋅結閤蛋白質(Zinc binding protein,ZnBP)基因的全長cDNA序列.經過剋隆、測序及序列分析,髮現該片段包含1箇完整開放閱讀框,長654箇堿基,編碼217箇氨基痠,蛋白質分子量為2.46×104,等電點為9.33.以湘棉18葉片DNA為模闆,通過PCR擴增分離穫得棉花ZnBP基因.經測序拼接,得到1 731 bp的棉花gDNA片段,編碼區含有3箇內含子.利用pET-28a(+)載體,開展瞭該基因的原覈錶達研究,在37℃、異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)終濃度1 mmol/L、誘導時間8h和轉速150r/min條件下,實現最優錶達；SDS-PAGE凝膠電泳及Western blotting檢測分析結果錶明,蛋白錶達正確.
위료해면화자결합단백적이화성질급결구특정,종이구건완성적면화(상면18)선체형성시기적cDNA균일화문고중사선출1개면화자결합단백질(Zinc binding protein,ZnBP)기인적전장cDNA서렬.경과극륭、측서급서렬분석,발현해편단포함1개완정개방열독광,장654개감기,편마217개안기산,단백질분자량위2.46×104,등전점위9.33.이상면18협편DNA위모판,통과PCR확증분리획득면화ZnBP기인.경측서병접,득도1 731 bp적면화gDNA편단,편마구함유3개내함자.이용pET-28a(+)재체,개전료해기인적원핵표체연구,재37℃、이병기-β-D-류대필남반유당감(IPTG)종농도1 mmol/L、유도시간8h화전속150r/min조건하,실현최우표체；SDS-PAGE응효전영급Western blotting검측분석결과표명,단백표체정학.
