寄生虫与医学昆虫学报
寄生蟲與醫學昆蟲學報
기생충여의학곤충학보
ACTA PARASITOLOGICA ET MEDICA ENTOMOLOGICA SINICA
2012年
3期
149-155
,共7页
反相高效液相色谱%家蝇Ⅲ龄幼虫%多肽%K562%293T
反相高效液相色譜%傢蠅Ⅲ齡幼蟲%多肽%K562%293T
반상고효액상색보%가승Ⅲ령유충%다태%K562%293T
为从家蝇Ⅲ龄幼虫体内提取具有抗K562细胞活性的物质,并对其组分化学性质及对人正常细胞的作用进行分析.本文用大肠杆菌诱导家蝇Ⅲ龄幼虫大量表达活性物质,然后通过研磨、离心、固相萃取法(SPE)初步分离活性物质,通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)进一步纯化提取活性组分,通过四甲基偶氮噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法和光镜观察法相结合,筛选出对K562有抑制作用的活性组分,并鉴定其对人正常细胞293T的作用.结果显示,从家蝇Ⅲ龄幼虫体内分离出4个具有抑制K562细胞活性的多肽组分(峰5~8),具有分离度高、纯度高等特点.当质量浓度为100 μg/mL和作用时间为24 h时,4个多肽组分均具有抗K562细胞的活性,其中峰5多肽组分和峰8多肽组分活性较强,对K562细胞的相对抑制率分别为48.52%和65.80%.结果表明,家蝇Ⅲ龄幼虫体内存在一些具有抗K562细胞活性的多肽,而且对人正常细胞几乎无杀伤作用.但是,这些多肽是否属于抗肿瘤肽还有待被证实.
為從傢蠅Ⅲ齡幼蟲體內提取具有抗K562細胞活性的物質,併對其組分化學性質及對人正常細胞的作用進行分析.本文用大腸桿菌誘導傢蠅Ⅲ齡幼蟲大量錶達活性物質,然後通過研磨、離心、固相萃取法(SPE)初步分離活性物質,通過反相高效液相色譜(RP-HPLC)進一步純化提取活性組分,通過四甲基偶氮噻唑藍(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法和光鏡觀察法相結閤,篩選齣對K562有抑製作用的活性組分,併鑒定其對人正常細胞293T的作用.結果顯示,從傢蠅Ⅲ齡幼蟲體內分離齣4箇具有抑製K562細胞活性的多肽組分(峰5~8),具有分離度高、純度高等特點.噹質量濃度為100 μg/mL和作用時間為24 h時,4箇多肽組分均具有抗K562細胞的活性,其中峰5多肽組分和峰8多肽組分活性較彊,對K562細胞的相對抑製率分彆為48.52%和65.80%.結果錶明,傢蠅Ⅲ齡幼蟲體內存在一些具有抗K562細胞活性的多肽,而且對人正常細胞幾乎無殺傷作用.但是,這些多肽是否屬于抗腫瘤肽還有待被證實.
위종가승Ⅲ령유충체내제취구유항K562세포활성적물질,병대기조분화학성질급대인정상세포적작용진행분석.본문용대장간균유도가승Ⅲ령유충대량표체활성물질,연후통과연마、리심、고상췌취법(SPE)초보분리활성물질,통과반상고효액상색보(RP-HPLC)진일보순화제취활성조분,통과사갑기우담새서람(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)비색법화광경관찰법상결합,사선출대K562유억제작용적활성조분,병감정기대인정상세포293T적작용.결과현시,종가승Ⅲ령유충체내분리출4개구유억제K562세포활성적다태조분(봉5~8),구유분리도고、순도고등특점.당질량농도위100 μg/mL화작용시간위24 h시,4개다태조분균구유항K562세포적활성,기중봉5다태조분화봉8다태조분활성교강,대K562세포적상대억제솔분별위48.52%화65.80%.결과표명,가승Ⅲ령유충체내존재일사구유항K562세포활성적다태,이차대인정상세포궤호무살상작용.단시,저사다태시부속우항종류태환유대피증실.